液相分离条件0923 .pdfVIP

10mM浓度的甲酸的紫外截止波长是210nm。你用的检测波长是205nm，这个波长下甲酸

的吸收也很强。我用过乙酸，发现在pH和乙酸浓度不变的情况下改变乙腈和水的比例，流

动相的紫外吸收是变化的，乙腈的比例越高，流动相的吸收越低。所以梯度的时候，基线这

种情况是很难避免的。不知道你分离几种物质，有两个选择：1换用其他波长试试；2如果

等度洗脱能满足分离要求就避免使用梯度洗脱。

甲酸带有羧基，低波长会有紫外吸收，所以流动相含有甲酸，紫外检测器的噪音就会较

大（低波长时）。你用梯度洗脱时，其中一相没有甲酸，流动相比例变化，两相混合后甲酸

的比例变化，基线就会漂移；如果两相都加入等量甲酸，基线漂移就会降低。

另，含有酚羟基的化合物，本身拖尾应该不会太严重，上质谱用ESI源用负离子模式更好，

用负离子模式流动相偏碱性离子信号更强些。高氯酸上不了LC-MS，但紫外用起来不错(调

节ph，且紫外基线状况较好)

常用的甲酸乙酸，甲酸铵乙酸铵等，水相和有机相都可以添加，浓度不要太高，10M以

下吧。两个有机相添加浓度都一样，在DAD上就没有漂移了。

1两者的pH不同，大部分正离子需要酸度高一点，象我们日常用的是甲酸-甲酸铵缓冲体系

2甲醇和乙腈对不同化合物的电离效率是有差别的，有些比较特殊的化合物只在一种溶剂中

电离效率高（比如菊酯类农药就只能用甲醇做流动相分析）

3甲醇的溶剂强度比乙腈低，所以色谱分离效果不一样的

4甲醇水的粘度比乙腈大，接近的色谱条件下，甲醇体系的压力高

离子型化合物流动相pH一般在方法建立时设定在pKa±2以外，以防止以两种形态存在，

这种情况下pH的改变对分离几乎无影响，如果想要通过调节pH来实现分离，那就要再

pKa±2以内进行调节，对分离的影响会很明显。

一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，

乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分

离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适

合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水

组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。

一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的

迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较

“拖”），最好是换溶剂

如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱

剂的极性亦须相应降低。

中草药成分的整体分子观是重要的，例如极性基团的数目愈多，被吸附的住能就会更大

些，在同系物中碳原子数目少些，被吸附也会强些。总之，只要两个成分在结构上存在差别，

就有可能分离，关键在于条件的选择。要根据被分离物质的性质，吸附剂的吸附强度，与溶

剂的性质这三者的相互关系来考虑。首先要考虑被分离物质的极性。如被分离物质极性很小

为不含氧的萜烯，或虽含氧但非极性基团，则需选用吸附性较强的吸附剂，并用弱极性溶剂

如石油醚或苯进行洗脱。但多数中药成分的极性较大，则需要选择吸附性能较弱的吸附剂（一

般Ⅲ～Ⅳ级）。采用的洗脱剂极性应由小到大按某一梯度递增，或可应用薄层层析以判断被

分离物在某种溶剂系统中的分离情况。此外，能否获得满意的分离，还与选择的溶剂梯度有

很大关系。现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系。如有多组分的

混合物，象植物油脂系由烷烃、烯烃、舀醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份。当以硅胶为

吸附剂时，使油脂被吸附后选用一系列混合溶剂进行洗脱，油脂中各单一成分即可按其极性

大小的不同依次被洗脱

（3）皂苷类。

人参皂苷：氯仿－甲醇－水(65:35:10)10℃以下放置的下层溶液或正丁醇－醋酸乙酯

－水(4:1:5)的上层溶液或氯仿－醋酸乙酯－甲醇－水(15:40:22:10)10℃以下放置的下层

溶液、芍药苷：氯仿－醋酸乙酯－甲醇－甲酸(40:5:10:0.2)、黄芩苷：醋酸乙酯－丁酮－

醋酸－水(10:7:5:3)、橙皮苷：苯—醋酸乙酯—甲酸—水(1:12:2.5:3)的上层溶液、葛根素：

氯仿－甲醇－水(14:5:0.5)、芦丁：醋酸乙酯－甲酸－水(8:1:1)。这类物质，由于存在糖

的多羟基结构，苷元的结构影响变小。展开剂中使用极性大的有机溶剂（氯仿、醋酸乙酯、

甲醇、正丁醇）和水。乙酸和甲酸的使用，一方面增大展开剂极性，