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微生物检验组操作手册

标本的接种与处理标准操作程序〔SOP-401〕

1.目的：标准标本的接种与处理，提高细菌检出率。

2.SOP-401变动程序：由操作者提出，并经科主任审核。

3.范围：各种细菌培养的标本。

4.溯源:全国临床检验操作规程(第二版)。

5.标准操作：

一般细菌培养、鉴定

适用于本项检查的标本是指除血液、尿液和粪便等有特殊处理要求的标

本，以及脓、痰、创面、胆汁、CSF、胸腹水、咽拭子等。

5.1.1.1在疾病早期或病症、体征明显时，最好在抗生素使用之前采集。

5.1.1.2选择适宜的解剖部位并以正确的方法和设备采集标本。

防止固有菌群的污染，尽可能保证样本代表感染过程。

5.1.1.4采集足够的数量，因标本量缺乏可能产生假阴性结果。

5.1.1.5每个标本都要标明病人的姓名、住院号、来源、特殊部位、采集的日期

时间和最初的采集者。

5.1.1.6将标本放在无菌并且有利于可疑病原菌生长的容器或培养液中，防止渗

漏和潜在的平安隐患，本实验室指定适用于本项检查的容器是无菌试

管、无菌拭子、无菌痰杯及各种灭菌标本留取容器。

一般细菌可在适宜的培养基〔如血平板、巧克力平板〕上，在一

定的温度、气体等条件下生长繁殖而形成菌落。根据菌落特征、涂片染

色镜检、生化反响和血清学试验可做出鉴定。

5.2检验流程

样品→接种→挑取可疑菌落→涂片染色镜检→生化反响、鉴定

→报告。

5.2.2操作说明

样品脓、痰、创面、胆汁、CSF、胸腹水、咽拭等。

接种血平板〔痰、CSF需加巧克力平板〕，35℃过夜，初次别离需5-10%CO。

2

镜检挑取可疑菌落涂片，革兰染色镜检。

生化反响、鉴定

手工生化试验：

葡萄球菌：凝固酶、甘露醇、尿素、新生霉素、麦芽糖、木糖、蔗糖、硝酸盐、

多粘菌素B、同时观察菌落颜色和溶血情况。

链球菌、肠球菌：触酶、七叶苷、肉汤、6.5%Nacl、CAMP、乳糖、山梨醇、阿拉

伯糖。

致病性大肠埃希菌：KIA、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、麦芽糖、IMViC、硝

酸盐。

变形杆菌：KIA、苯丙氨酸、麦芽糖、靛基质、鸟氨酸。

灰凸菌落，典型的阴性球杆菌：KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝

酸盐、丙二酸盐、44℃。

革兰氏阴性杆菌，氧化酶阴性：KIA、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、

葡萄糖、IMViC、硝酸盐。

革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性：KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝

酸盐、七叶苷、乙酰胺。

可疑气单胞菌，氧化酶阳性：KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸

盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、VP〔25℃〕。

5.2.2.4.9可疑弧菌，氧化酶阳性：同气单胞菌生化，另加不同浓度Nacl。

缓慢生长分枝杆菌：暗产色、光产色、耐热触酶、硝酸盐、尿素、吐温-80。

快速生长分枝杆菌：45℃生长、暗产色、光产色、MAC琼脂〔28℃〕、硝酸盐、

铁吸收试验〔28℃〕、5%Nacl肉汤〔28℃〕、阿拉伯糖、木糖、卫茅醇、

枸橼酸盐〔28℃〕、甘露醇〔28℃〕。

另见下表：

一般细菌生化反响和鉴定流程

菌落、涂片鉴定

G－球菌氧化酶、DNA酶、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖或接种APINH

G－杆菌OX〔＋〕ATBID32GN或API20Ne或手工生化

OX〔－〕ATBID32E或API20E或手工生化

G＋杆菌视情况而定

G＋芽胞杆菌根据涂片染色、菌落特征、简单手工生化反映鉴定

李斯特