DB12∕T 863-2019 水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程.docxVIP

ICS?65.020.30

B?44

DB12

天 津 市 地 方 标 准

DB12/T?863—?2019

水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术

规程

Aquatic?probiotics---Technical?regulation?for?production?of?Bacillus

amyloliquefaciens

2?0?1?9?-?0?1?-?14?发布 2?0?1?9?-?0?2?-?15?实施

天津市市场监督管理委员会 发布

DB12/T?863—?2019

刖 言

本标准依据GB/T?1.1—2?0?0?9?《标?准?化?工?作?导?则?第?1部分：标准的结构和编写》的要求起草。

本标准由天津市农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心。

本标准主要起草人：谢凤行、张峰峰、周可、赵琼、赵玉洁、孙海波、高宝山。

I

DB12/T?863—?2019

水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程

i??范围

本标准规定了解淀粉芽胞杆菌生产中所涉及的生产环境和设备、生产技术流程、质量检测和储运。

本标准适用于水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌的生产。

2??规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件?。凡是不注日期的引用文件，其?最?新?版?本?（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB?3?0?9?5?环境空气质量标准

GB?3?8?3?8?地表水环境质量标准

GB?2?0?2?8?7?农用微生物菌剂

GB/T?2?6?4?2?8?饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测

3??术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

解淀粉芽胞杆菌 bacillus?amyloliquefaciens

属于芽胞杆菌科，芽胞杆菌属，杆状，有鞭毛，革兰氏阳性菌，芽胞椭圆形，中生或近中生。

3.2

原?菌?种?the?original?strain

由单菌落分离纯化，并在固体斜面上繁殖保存的菌种。

3.3

一级菌种 first?class?strain

原菌种在培养皿上活化，挑取单菌落接种至三角瓶中，振荡培养的菌种。

3.4

二级菌种 second?class?strain

三角瓶中的菌种接种至种子罐中，在种子罐中放大培养的菌种。

4??生产环境和设备要求

4?.?1?生产环境

4?.?1?.?1?厂区空气质量符合大气环境质量标准GB?3?0?9?5?中?II类要求。

4?.?1?.?2?发酵用水符合地表水环境质量标准GB?3?8?3?8?中III类水质要求，冷却水及其他用水符合该标准中

IV类水质要求。

4?.?1?.?3?生产车间配备消毒灭菌设施，菌种储藏室和无菌操作间与生产车间分开。

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DB12/T?863—?2019

4?2?生产设备

生产设备需为不锈钢发酵罐，体积根据生产规模自定。

5??生产技术流程

5?.?1?生产流程

生产技术流程见附录A

5?.?2?菌种质量

5?.?2?.?1?用于发酵的菌种应有菌种鉴定报告或菌株来源相关信息。

5?.?2?.?2?在发酵前应先检测菌种的纯度和性能，如不纯或退化，应先进行提纯复壮。

5?.?2?.?3?菌种在上罐生产之前需检测种子罐中菌体的纯度和浓度，不能有杂菌污染，浓度达到每毫升亿

级以上。

5.3 培养基

5?.?3?.?1?原菌种和一级菌种的培养基应保证菌种生长的延滞期短，生长旺盛，碳?、氮源营养丰富。

5?.?3?.?2?二级菌种培养基原则上为发酵培养基或接近发酵培养基。

5?.?3?.?3?发酵培养基在保证菌体生长旺盛，利于芽胞形成的前提下，尽量利用来源充足、价格低廉的原

料。

5.4 灭菌

C C5?.?4?.?1?液体发酵，发酵罐的装液量50%?70%，液体培养基、发酵设备、管道

C C

灭菌，灭菌条件为?121?°???125?°?，0.1?MPa?0.15?MPa，灭菌?20?min?30?min?。

5.4.2 固体物料含水率50%?60%，121?C???130?C?，灭?菌?1.0?h?2.0?h?。

5?.?4?.?3?灭菌后无菌操作取灭菌后的培养基，制片，染色，镜检，无微生物说明灭菌彻底，若有，需重

复?5?.?3?的工作。

5?.?5?接种

摇瓶种子到发酵罐种子接种量为1%?5%，种子罐到发酵罐接种量为5%?7%。接种保证无菌操作，调

节?进?、排气阀，使接种口有气体排出。

5?.?6?发酵

5?.?6?.?1?芽胞杆菌的发酵温度为25?C??37?C?。

5?.?6?.?2?液体发酵在发酵过程中通入无菌空气，通?气?量?为?10?m3/h.t?20?m3/h.t，搅?拌?转?数?80?r/min?

150?r/min?。

5?.?6?.?3?芽胞率达到80%以上终止发