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WesternBlotting

1、WesternBlotting的原理

WesternBlotting称为蛋白质印迹,目的是获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况。基本原理是将目的蛋白通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，再将经过PAGE 分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分 。

2、关于内参

内参一般是指由管家基因编码表达的蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物

在WesternBlotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样结果才更为可信。此

外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个WesternBlo显t光体系是否正常。

3、基本过程

色或者发

提取细胞或组织蛋白、测定大致含量 制备SDS 胶 蛋白样品变性、电泳 电泳转膜 封闭1h 室温下孵育一抗1