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ISO与美国FDA的不同处
食品微生物检查方法(FDA与ISO对比)
内容提纲:
l????菌落总数检测
l????大肠菌群及大肠杆菌检测
l????金黄色葡萄球菌检测
l????沙门氏菌检测
l????单核细胞增生李斯特氏菌检测
??菌落总数测定——菌落总数的概念
l????菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(ml)或表面积(cm2)内,所含能于某种固体培养基上,在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。
菌落总数测定——卫生学意义
l????鉴定食品被细菌污染的限度及卫生质量。
l????及时反映食品加工过程是否符合卫生规定,为被检食品卫生学评价提供依据。
l????通常认为,食品中细菌数量越多,则可考虑致病菌污染的也许性越大,菌落总数的多少在一定限度上标志着食品卫生质量的优劣。
FDABAM菌落总数测定流程
检样xg/mL+9xml稀释液(磷酸盐缓冲液)
适当十倍稀释样品
选择2~3个连续适宜稀释度
各取1mL分别加入灭菌平皿内
(每个稀释度做两个平行)
每皿内加入适量平板计数琼脂(PCA)
??????????35℃48±2h
菌落计数
FDABAM菌落计数方法
l????选择25~250CFU之间的菌落进行计数,计算公式如下:N=∑C/(1*n1+0.1*n2)*d
l????所有平板的菌落数都局限性25CFU,报告EAPC/ml(g)为<25*1/d。EAPC:estimatedaerobicplatecount
l????所有平板的菌落数都超过250CFU,但局限性100/cm2,报告EAPC/ml(g)为最接近250CFU的平板菌落数的估计值,乘以相应的稀释度。
l????所有平板的菌落数都超过100/cm2,计算平板的面积(直径为90mm的平板面积为65cm2),估计最高稀释度每cm2的菌落数,乘以相应平板面积作为该稀释度的菌落计数结果,报告EAPC/ml(g)为>65*100*1/d。
l????无法计数的平板报告LA(LaboratoryAccident)。
l????最终结果保存前两位有效数字。按照4舍6入,5是奇进偶不进。
ISO4833-2023菌落总数测定流程
检样xg/mL+9xml稀释液(磷酸盐缓冲液)
适当十倍稀释样品
选择2~3个连续适宜稀释度
各取1mL分别加入灭菌平皿内
(每个稀释度做两个平行)
每皿内加入适量(12~15mL)
平板计数琼脂(PCA),
????????????30±1℃,72±3h
菌落计数
ISO4833-2023菌落计数方法
l????选择连续2个稀释度不超过300CFU的平板,且一个平板至少含15CFU进行计数,计算公式如下:N=∑C/(n1+0.1*n2)*d
l????所有平板的菌落数都局限性15CFU,计算2平板菌落的算术平均值m,液体样品:NE=m??固体样品:NE=m×d-1
l????无菌生长:液体样品:lessthan1;????固体样品:lessthan1×d-1
l????最终结果保存前两位有效数字。
菌落总数测定几点说明
l????由于检样中采用30/35℃有氧条件下培养,因而并不是样品中实际的总活菌数,一些特殊营养规定的细菌、厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌,均难以反映出来。
l????鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在,因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块,也可以来源于单个细胞,因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数,而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位(colonyformingunits,CFU)报告。
菌落总数测定几点规定
l????每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过15min,重要为防止细菌增殖和产生片状菌落。样液与琼脂应充足混合,避免将混合物溅到平皿壁和皿盖上。皿内琼脂凝固后,不要长时间放置,然后倒置培养,可避免菌落蔓延生长。
l????检样过程中应用稀释剂做空白对照,用以鉴定稀释液、培养基、平皿或吸管也许存在的污染。同时,检样过程中应在工作台上打开一块空白平板计数琼脂,其暴露时间应与检样时间相称,以了解检样在检查操作过程中有无受到来自空气的污染。
l????检样稀释液有时带有食品颗粒,为避免与细菌菌落发生混淆,可作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿,不经培养,于4℃放置,以便在计数检样时用作对照。
大肠菌群的定义
l????大肠菌
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