重组犬α型干扰素的制备方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101100664A

(43)申请公布日2008.01.09

(21)申请号CN200610041237.X

(22)申请日2006.07.28

(71)申请人王明丽

地址230000安徽省合肥市梅山路安医大微生物教研室

(72)发明人王明丽

(74)专利代理机构安徽合肥华信知识产权代理有限公司

代理人余成俊

(51)Int.CI

C12N15/09

C12N15/21

C07K1/14

C07K14/56

A61K38/21

A61K9/19

A61P31/12

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

重组犬α型干扰素的制备方法

(57)摘要

本发明公开了一种重组犬α型干扰

素的制备方法，系将特异性引物PCR扩增

犬α型干扰素的目的基因，与表达载体

PET-28a进行连接，转化大肠杆菌，使其

高效表达犬α型干扰素，经高度纯化后除

菌、分装和冻干等工艺制成重组犬α型干

扰素冻干粉针剂。本发明制备工艺简单，

易于工业化生产，经冻干后易运送和保

藏。产品质量可靠。重组犬α型注射犬机

体后，具有疗效好、安全可靠和无毒副作

用等特点。可用于治疗犬细小病毒病、病

毒性腹泻等疾病，是一种广谱抗病毒制

剂。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1、重组犬α型干扰素的制备方法，是依次进行以下步骤：

(1)、构建克隆载体：

目的基因为：

atggccctgccctgctccttctcggtggccctggtgctgctcagctgccactccctgtgctgtctggcttgcgacctgcccg

acacccacagcctgcgcaactggagggtcctgacgctcctgggacagatgaggagactctccgccagctcttgtgacca

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ctgggagatggtccgagcagaaatcgggagatccttcttctccttgaccatcttgcaagaaagagtaaggaggaggaaat

ga

特异性引物：上游：AATTTGCCACCTGCCCGACA

下游：GATCTTTCCTCCTCCTGATTCTTTC

克隆载体：pMD18-Tsimplevector

(2)、构建表达载体：

表达载体：PET-28a

(3)、重组蛋白的表达：

挑取载体构建成功的重组表达菌进行扩增、放大培养，并加入诱导剂诱导表达；

(4)、鉴定重组蛋白；

(5)、纯化重组蛋白，得到粗制品干扰素。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

(1)、构建克隆载体：用特异性引物PCR扩增犬α型干扰素的目的基因后，将目的

基因克隆于pMD18-Tsimplevector，转化JM109大肠杆菌，涂LB平板进行蓝白斑

筛选，取白色样的克隆菌