江西省血液中心核酸检测经验介绍课件.pptVIP

江西省血液中心核酸检测经验介绍钱榕

主要内容o中心简介o核酸检测实验室的设置及工作流程o核酸检测实验室管理和检测关键控制点o开站核酸检测情况

江西省血液中心概况江西省血液中心于1984年成立，隶属省卫生厅管理的公共卫生事业单位。占地面积63.4亩，总建筑面积21788㎡,现有职工171人，供应省直13家医疗机构临床用血，2011年总供血量为23.8吨，并承担全省采供血机构质量控制与评价、业务技术指导、人才培训及血液相关的科研等任务。自2006年起，临床用血已实现100%来自于自愿无偿献血。成分输血达到99.8%。

p中心重视科研工作，致力从临床输血治疗和开展新技术治疗的需求出发，开展了血液去除白细胞、血浆病毒灭活等新技术。2010年4月份，中心与北京、上海、广州等12个省市15所采供血机构一道，被卫生部列为我国内地首批核酸检测试点单位。此外，中心先后开展了骨髓移植配血、器官移植配型(基因法)、产前血型血清学检测、新生儿溶血病检测、亲子鉴定(基因法)等研究工作。

中心核心价值观忠诚履行输血使命精益服务健康人生

中心环境

核酸检测实验室的设置o标本交接离心区：用于核酸标本的接收、离心处理；设备：大容量低温离心机2台o混样区：用于血液标本开盖、混样、以及质控品的加样；设备：全自动混样仪HAMILTONSTARIVD2台、生物安全柜1台、移动紫外车3台；o提取扩增检测区：用于核酸的提取、PCR扩增和检测。设备：3套COBAS?AmpliPrep+COBAS?TaqMan、服务器1台、试剂暂存冰箱1台、移动紫外车3台

核酸检测实验室的设置实验室平面图

o检测系统：cobass201核酸血液筛查系统o设备配置：2STAR+3CAP+3docking+3CTMo试剂组成：cobas?TaqScreenMPXTest（96人份，一代）cobas?TaqScreenMPXControlKit（一代：6*6）cobas?TaqScreenWashReagent

核酸检测实验室工作流程p全血标本标本采集后4小时内进行离心处理。样本离心后先进行常规酶免检测，然后将酶免试剂阴性结果标本进行六混样核酸检测。如混样检测有反应性，再进行拆分检测。o机采标本标本采集后4小时内进行离心处理；加样模式：六混样（1机采标本+5全血标本）

核酸检测实验室工作流程第一批第二批第三批核酸免第一批阴性）StartNAT核酸免第二批阴性）核酸免第三批阴性）2staffs核酸检测如有阳性结果，当天进行拆分实验

核酸检测实验室工作流程核酸阳性本拆分1staff全部样本在48小时内出报告，符合卫生部核酸检测要求

核酸检测的关键控制点—标本p采血管的选择p留样方式及注意事项p运输过程中标本质量保证p标本处理方式及细节解读p标本检测

核酸检测采血管的要求p抗凝剂：首选EDTA和枸橼酸盐，避免使用肝素抗凝。p无菌p无DNA酶、无RNA酶：p含分离胶的真空采血管；

标本留取细节解读p防污染留取人员的个人防护，留取前的清洁消毒，留取过程中保持密闭，防止其他可能污染物。p充分混匀注意样品采集后的充分混匀，一般上下颠倒５次以上，如操作不规范，则容易出现凝块，给后续检测带来弊端：核酸检测出现凝块报错，引起人力、试剂等不必要的浪费，增加标本污染风险。p标本量标本留取应检查是否足量，如量少，应更换采血管重新留取，杜绝开盖留取。

NAT标本溶血及影响p溶血：原因多为标本留取中机械作用致红细胞破裂引起，如标本留取不畅、留取速度过快等；另外，剧烈震荡也可引起溶血，如运输颠簸等p溶血对NAT检测的影响：血红蛋白是核酸检测的主要抑制物之一，可抑制核酸检测；另外可核酸酶的释放加速核酸降解。p如何避免溶血现象出现？标本留取时将血液顺管壁缓慢注入真空管中；另外避免震荡，以防血细胞破裂而溶血。

NAT标本脂血及影响?脂血是指血液标本采集后，经过离心处理，分离出来的血清中含有脂类物质。从外观上看，血浆呈浑浊的乳白色。?脂血对NAT检测的影响：脂血易引起加样环节液面感应异常报错；高脂血标本可通过对荧光的屏蔽和吸收作用而干扰检测。?如何避免留取脂血标本？应注意饮食情况等的征询，可一定程度消除留取脂血标本。

NAT标本中的其它影响因素?内源性：免疫球蛋白、蛋白酶、离子等；?外源性：肝素抗凝剂、手套滑石粉、标本容器或采样器材中含有的抑制物等。

标本的运输冷链控制专用标本运输箱的使用；确保标本在采集后4小时内离心。

核酸标本离心细节解读p离心机的选择：低温离心机；p离心条件：3000g,20min，应根据实际进行调整以确保离心充分；p另外，为更好的消除凝块，可在离心前再次颠倒混匀；也可在检测前进行二次离心