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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN104630331A
(43)申请公布日2015.05.20
(21)申请号CN201310563741.6
(22)申请日2013.11.14
(71)申请人广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
地址510630广东省广州市天河区珠江新城花城大道66号国检大厦
(72)发明人刘津李建军李婷李志勇刘青何日荣关丽军席静
(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司
代理人郑莹
(51)Int.CI
C12Q1/68
C12N15/11
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
巴西坚果过敏原的恒温扩增检测引
物、试剂盒及方法
(57)摘要
本发明公开了一种巴西坚果过敏原
的恒温扩增检测引物、试剂盒及方法。本
发明方法基于环介导等温扩增技术,根据
巴西坚果2S蛋白的编码基因序列设计6条
特异性引物,在具有链置换活性的
Bst2.0WarmStarDNA聚合酶作用下,在
63~65℃对核酸扩增45~60min,扩增效
率可以达到10
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1.一种巴西坚果过敏原的恒温扩增检测方法,包括以下步骤:
1)根据巴西坚果2S蛋白的编码基因设计特异性恒温扩增检测引物;
2)待检样品DNA在上述引物、iBst/i2.0WarmstarDNA聚合酶存在的条件下
进行恒温扩增反应;
3)根据扩增结果判断待检样品中是否存在巴西坚果过敏原成分。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述恒温扩增检测引物的序列分
别如下所示:
外引物1:CATGAGACAGCAGGTTAGTTAT(SEQIDNo:1);
外引物2:ATCTCATGGGACTGAGGTT(SEQIDNo:2);
内引物1:CTCATATGCGGCTCCATTCCCATGCGAAATGAACCCTGG
(SEQIDNo:3);
内引物2:AGAGCTGCAGATGCGAAGGGGTTGCATCTCCTTCTGTT
(SEQIDNo:4);
环引物1:CTGGGCATGGTCTGGTAC(SEQIDNo:5);
环引物2:AGGATGATGATGAGGATGATGC(SEQIDNo:6)。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法,其特征在于,步骤2)所述恒温扩增反应
的体系为:25μL反应体系中含有外引物1和外引物2各2~10μM、内引物1和内
引物2各20~60μM、环引物1和环引物2各5~20μM、
iBst/i2.0WarmstarDNA聚合酶5~10U、pH8.8的Tris-HCl20mM、KCl8~
12mM、(NH4)sub2/subSOsub4/sub8~12mM、0.08~0.12%Tween-20、
dNTPs1.5~1.7mM、MgSOsub4/sub0.6~1.0mM、甜菜碱0.7~0.9M,待检样
品DNA2μL。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,步骤2)所述恒温扩增反应的体
系为:25μL反应体系中含有外引物1和外引物2各5μM、内引物1和内引物2各
40μM、环引物1和环引物2各20μM、iBst/i2.0WarmstarDNA聚合酶8U、
pH8.8的Tris-HCl20mM、KCl10mM、
(NH4)sub2/subSOsub4/sub10mM、0.1%Tween-20、dNTPs1.6mM、
MgSOsub4/
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