大肠菌群培训课件.pptxVIP

定义·在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。·直接或间接来自人与温血动物的肠道；包括肠杆菌科的大肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属和克雷伯菌属，其中大肠埃希菌属为典型大肠埃希氏菌。

大肠菌群的卫生学意义·人与温血动物粪便污染的指示菌：·大肠埃希氏菌——粪便近期污染；·其他菌属——粪便陈旧污染。·肠道致病菌污染食品的指示菌：·与肠道致病菌(如沙门氏菌、志贺氏菌)来源相同；在外界生存的时间与主要肠道致病菌一致。

修订的主要内容·本标准与GB4789.2-2010相比，主要修改如下：·删除了标准的英文名称；·修改了发布单位名称：·2010版本“中华人民共和国卫生部”·2016版本“中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会”和“国家食品药品监督管理总局”·前言：·本标准代替GB4789.3-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》GB/T4789.32-2002《食品卫生微生物学检验大肠菌群的快速检测》和SN/T0169-2010《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数部分。·增加了检验原理；·修改了适用范围；·修改了典型菌落的形态描述；·修改了第二法平板菌落数的选择；·修改了第二法证实试验；·修改了第二法平板计数的报告。下载高清无水印

大肠菌群计数·第一法MPN法·适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数；·第二法平板计数法·适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。

术语和定义·大肠菌群Coliforms·在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。·最可能数MostProbableNumber(MPN)·基于泊松分布的一种间接计数方法。

检验原理·MPN法·MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。·平板计数法·大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落。

检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择适宜三个连续稀释度的样品匀液接种LST36℃±1℃24h-48h不产气产气BGLB肉汤36℃±1℃48h±2h不产气产气大肠菌群阴性管大肠菌群阳性管查MPN表结果报告大肠菌群计数第一法MPN法无水印

LST初发酵BGLB验证报告

1.成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0g化钠5.0g氯提供氮源调节渗透压提供碳源、指示系统乳糖5.0g调节pH磷酸氢二钾(K2HPO4)2.75g调节pH磷酸二氢钾(KH2P04)2.75月桂基硫酸钠0.1gg抑制革兰氏阳性菌生长蒸馏水1000mLpH6.8±0.22.制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。初发酵培养基：月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤第一步培养基

大肠菌群计数MPN法-LST肉汤发酵

·第二步培养基：煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤·成分作用·蛋白胨10.0g提供氮源·乳糖10.0g提供碳源并作为指示剂·牛胆粉(oxgall或oxbile)溶液200mL生长·0.1%煌绿水溶液13.3mL性菌生长·蒸馏水800mL·pH7.2±0.1抑制革兰阳性菌抑制革兰阳性菌和部分阴

7操作步骤1.样品的稀释1.固体和半固体食品：以无菌操作取25±0.1g样品，放入装有225mL生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min均质1min~2min,制成1:10样品匀液，或放入225mL生理盐水的无菌均质袋中，用均质器拍打1~2min,制成1:10的样品匀液。2.液体食品：以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)中，以30cm幅度、于7s内振摇25次(或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇),制成1:10的样品匀液。3.样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl予以调节。

4.用1mL无菌吸管或移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入装有9mL生理盐水的无菌试管中(