基因工程抗体.pptx

基因工程抗体;单克隆抗体用于治疗存在问题;理想抗体药品性质;;抗体药品改造方向;单克隆抗体人源化改进;1、抗体人源化

鼠单克隆抗体人源化：嵌合抗体、改型抗体

小分子抗体：单价(Fab、ScFv、单域抗体、

超变区多肽)、多价（Di-,Tri-,Minibody）

特殊类型抗体(双特异性抗体、细胞内抗体、

抗原化抗体、免疫脂质体)

抗体融合蛋白（免疫粘连素、免疫毒素、催

化抗体）;VH和VL是抗原决定簇结合位点

高变区HVR

决定簇互补区CDR

骨架区FR

CH1和CL：Ig同种异型遗传标志

CH2：补体结合位点

CH3：一些细胞Fc受体结合部位;第一代抗体人源化—嵌合抗体

从杂交瘤细胞分离出鼠MAb功效性可变区基因，与人Ig恒定区（决定免疫原性）基因连接，插入适当表示载体，转染宿主细胞，表示人-鼠嵌合抗体。嵌合抗体因为这两部分在空间结构上相对独立，其独特抗体亲和力保持得很好，但因鼠单抗可变区存在，应用时仍有较强免疫排斥反应。

特点：降低了鼠源性抗体免疫原性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原能力。;Pr鼠VH人CHPr鼠VL人CL;;第二代抗体人源化——改型抗体;第二代改型抗体：

①应用了人抗体基因库；

②引进计算机技术模拟抗体分子立体结构(分子模拟法)；

③使用了鼠人嵌合FR。其目标是取得含有高亲和力治疗性抗体;;小分子抗体

人源化抗体属完全抗体分子。经过基因重组技术，能够在保持原有抗原结合活性基础上，把完整抗体分子改造成较小分子，称为小分子抗体。

依据其价数不一样可分为单价小分子抗体及多价小分子抗体两种。;单价小分子抗体

一、Fab抗体

Fab段由重链V区及CH1功效区与整个轻链以二硫键形式连接而成，主要发挥抗体抗原结合功效。Fab抗体只有完整IgG1/3。;二、单链抗体(ScFv)

定义：用基因工程方法，

将抗体VH和VL（重链和轻链可变区）经过一个连接肽连接而成小分子抗体，

功效：含有很好抗原结合能力，且分子量小、穿透力强、免疫原性低等特征。可与其它效应分子构建成各种含有新功效抗体分子，是构建免疫毒素和双特异抗体等理想而基本??件。;ScFv应用：

用于肿瘤导向治疗

肿瘤影像分布

基因治疗

研究基因结构与功效关系;三、单域抗体

抗体与抗原结合主要由IgV区决定，所以只含V区基因片段小分子抗体，即只有VH或VL一个功效结构域，也能保持原单克隆抗体特异性。这种小分子抗体片段就称为单域或单区抗体，其分子量仅为整个Ig分子1／12，故也称之为小抗体。;四.超变区多肽(hypervariableregionpolypeptides)

抗体抗原结合是经过补体决定区（CDR）来实现。所以，CDR是组成抗原抗体结合最小结构单位。依据这一特点，能够设计出那些在抗原识别及亲和力方面有主要意义CDR多肽，直接用于诊疗或治疗，可望取得理想结果。这种只含有一个CDR多肽抗体，称为超变区多肽，亦称为最小识别单位(minimalrecognitionunit,MRU)。;多价小分子抗体

在ScFv基础上，能够把两个或两个以上ScFv重组在一起，由此可制备成多价小分子抗体即微型抗体（简称多价微抗）。其中包含双链抗体(diabody)，微型抗体（minibody），三链抗体(triabody)及四链抗体(tetrabody)等。;;二、三链抗体(triabody)

在制备单链抗体时，当接头长度为2个或2个以下氨基酸残基时，或者直接把VH结构域N末端与VL结构域C末端相连，经过非共价键而形成三聚体，称为三链抗体。接头长度在3～12个氨基酸残基时，则形成双链抗体。;;四、双特异性抗体（BfAb）

天然Ig是由两个完全相同VL和VH区域组成，该区域是特异性识别并结合抗原关键部位。而经人工设计构建双特异性抗体（BsAb）则由两个不一样抗原结合位点组成，可同时与两种不一样抗原决定簇结合，并可将其偶连药品、酶或放射性核素等导向到靶部位，这种含有双价双特异性抗体又称为双功效抗体（bifunctionalantibody,BfAb）;双特异性抗体特点

将免疫细胞锚着于肿瘤部位，提升肿瘤部位效靶比。

不受MHC限制，直接激活免疫细胞杀瘤机制。;1;提升抗体

效应功效;抗体融合蛋白：抗体一部分被非抗体序列替换，所形成含有新特征融合蛋白。

依据构建方式不一