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MCF7细胞中haS-miR-103靶向CARM1基因的初步研究的开题报告

一、研究背景及意义

乳腺癌是指一类在乳腺组织内恶性生长的癌症，已成为全球女性最常见的恶性肿瘤之一。其中，人类乳腺癌细胞株MCF7作为经典的乳腺癌细胞株，在乳腺癌的发病机制和治疗研究中得到了广泛应用。CARM1（coactivator-associatedargininemethyltransferase1）是一种类型I基因家族中的组蛋白辅助修饰酶，存在于细胞核中，在RNA转录、转录后修饰和染色质结构修饰等过程中发挥重要作用。研究表明，CARM1在多种肿瘤中高表达，如乳腺癌、肺癌、子宫内膜癌、胰腺癌等。因此，研究CARM1异常表达的调控机制有助于乳腺癌的早期诊断和治疗。

微RNA是一种重要的调控元件，能与mRNA互相作用，并通过RNA诱导靶向细胞凋亡、增殖、分化、应激反应等功能。研究表明，haS-miR-103在多种肿瘤中异常表达，包括乳腺癌，同时其也能够影响细胞的生理过程。

综上考虑，本研究旨在探究在MCF7细胞中，haS-miR-103是否可以通过靶向调控CARM1基因表达来对乳腺癌的发病及治疗产生影响。

二、研究目的

1.检测MCF7细胞中haS-miR-103的表达水平；

2.利用文献报道的方法构建靶向CARM1基因的haS-miR-103；

3.检测构建后的靶向CARM1基因的haS-miR-103对MCF7细胞增殖、凋亡及迁移的影响；

4.初步探究haS-miR-103通过CARM1基因在MCF7细胞中的调控机制。

三、研究方法

1.细胞培养：采用MCF7人乳腺癌细胞系，采用DMEM培养基（含10%胎牛血清）进行培养。

2.表达水平检测：利用逆转录实时荧光定量PCR，检测MCF7细胞中haS-miR-103表达水平。

3.基因突变：利用GenePharma公司提供的工具构建靶向CARM1基因的haS-miR-103。

4.增殖实验：利用MTT法检测不同处理组MCF7细胞的增殖速率。

5.凋亡分析：采用AnnexinV-PE/7-AAD两染色法检测细胞凋亡情况。

6.细胞迁移实验：采用Transwell实验检测细胞迁移的能力。

7.相关基因蛋白的检测：采用Westernblot检测MCF7细胞中CARM1、E-cadherin、N-cadherin的表达水平。

四、预期结果

1.在MCF7细胞系中探究haS-miR-103表达水平；

2.利用文献报道的方法构建靶向CARM1基因的haS-miR-103；

3.检测构建后的靶向CARM1基因的haS-miR-103对MCF7细胞增殖、凋亡及迁移的影响；

4.初步探究haS-miR-103通过CARM1基因在MCF7细胞中的调控机制。