H7亚型禽流感RTPCR检测方法的建立条件优化及应用.doc

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华南农业大学

大学生科技创新活动项目

H7亚型禽流感特异性RTPCR检测方法的建立条件优化及应用

徐珊张停婷陈梓栋

（华南农业大学兽医学院广州510640）

指导教师:辛朝安任涛职称教授副教授

所在院部：兽医学院

专业年级：动物医学2002级

华南农业大学

大学生科技创新活动项目指导中心

H7亚型禽流感特异性RTPCR检测方法的建立的条件优化及应用

徐珊，张停婷，陈梓栋

(华南农业大学兽医学院，广东广州510640)

摘要：参照GenBank中已发表的H7亚型禽流感病毒血凝素（HA）基因设计合成了一对的特异性强敏感性高的引物，预计扩增片段的大小约为310bp，利用这对引物，通过对RTPCR反应体系和反应条件的优化，建立了针对H7亚型高致病性禽流感的特异性RTPCR检测方法。敏感性试验和特异性试验结果表明，该方法敏感性高，对H7亚型AIV尿囊液能检出的最低稀释度可达104，相当于08×10276EID50（半数感染量），且应用该引物对NDV（新城疫病毒）IBV（传染性支气管炎病毒）及流感其他亚型（H1H3H5H9）在相同反应条件下扩增没有出现假阳性反应。用所建立RTPCR方法检测发病鸡组织病料及咽肛拭子，检测结果与鸡胚病毒分离结果相比阳性符合率高达906％。完成此RTPCR反应程序只需34小时。结果表明，该方法具有快速敏感特异等优点，同时还具有较好的生物安全性。是AIVH7亚型鉴定和快速诊断的有效方法。

关键词：H7亚型禽流感RTPCR检测

DevelopmentandoptimizationofaspecificRTPCRmethodfordetectingH7subtypeofavianinfluenzavirus

XuShan，ZhangTingting，ChenZidong

(VeterinaryCollegeofSouthChinaAgriculturalUniversity,GuangZhouGuangdong510640）

Abstract:AspecificRTPCRdetectionsystemwasdevelopedandoptimizedtodetectthehighlypathogenicAIVH7subtypeAsetofspecificprimerswasdesignedforAIVH7subtypeinthisexperiment,whichwaspredictedtoamplifyaproductof310bpinlengthThesensitivityandthespecificityassaysindicatedthatallantoicfluidcouldbeidentifiedbythisspecificRTPCRis104,whichisabout08×10276of50%egginfectionsdoseandnofalsepositiveresultswereobservedwhenallantoicfluidsampleswithNDVIBVaswellasothersubtypesofAIVwereassayedunderthesamereationconditionThecoincidenceofpositiveratewasupto906%betweenthedetectiontotissuesandswabsofnonimmunefowlbythisRTPCR,andtheviralisolationofembryosThewholeRTPCRproceducewascompletedinabout34hThemethodthereforeproviderapid,simple,safe,sensitive,subtypespecificdianosisofsubtypeH7ofavianinfluenzavirusinclinicalsamples

KEYWORDS：H7subtypeofavianinfluenzaSpecificRTPCRDetect

禽流感（AI）,是由正黏病毒科流感病毒属的A型流感病毒（AIV）引起的禽类的一种从呼吸系统到严重的全身性败血症等多种症状的综合症。被国际兽疫局定为A类传染病，我国把高致病性禽流感列