神经肌肉组织活检常用方法和步骤.pdfVIP

肌肉活检样品取材和送检注意事项

一般原则

1.通常使用活组织切开检查法获取肌肉组织;

2.对于具有不协调病理学功能障碍患者,切开活组织检查非常必要,例如多发性肌炎;

3.烧伤、缝合或磁夹部位的肌肉组织不能取样送检;

4.细针穿刺肌肉组织活检可以减少病人的损伤,但也可能会取样不全,丢失肌肉斑片或肌

外膜组织;

5.尽可能在同一活检取材位置获取数个肌肉样品,特别是对于多病灶疾病,炎性肌病,需要

做代谢分析的肌病可疑患者;

肌肉样品送检

1.肌肉样品在湿盐水纱布中可保存几个小时,注意肌肉不应该浸在盐水、固定剂或其

他液体中,同时样品须存放于凉爽处;

2.样品不能及时送检时可用充足的干冰保存过夜;

肌肉样品冷冻与保存

1.样品经异戊烷予冷器处理冷冻在-160℃液氮中,也可使用丙酮和干冰的混合液冷冻,肌

肉冷冻后最好密封贮存在-70℃,防止酶活性和水分丢失,肌肉样品在液氮或-70℃冰箱

中可长期保存;

2.经上面方法处理的标本肌肉纤维形态好,光镜检查时可获得大多数诊断信息;

3.为了避免人为现象,送检样品冷冻处理时应该迅速

电镜样品固定

1.部分样品固定于4%戊二醛,固定的肌肉组织多用塑料包埋剂包埋;

2.电镜分析可以很清楚显现肌膜毛细血管;

石蜡包埋材料

1.石蜡包埋的材料有利于炎症和炎细胞形态观察,但是石蜡切片肌纤维的形态较差;

2.福尔马林固定、石蜡包埋切片无法进行对于某些组织化学和免疫组织化学染色,因此为

了满足诊断需要,多数肌肉活检样品需要立即进行冷冻保存或新鲜标本送检;

3.需要石蜡包埋切片的标本应用福尔马林固定;

病理实验室肌肉活检样品常规处理方法

骨骼肌活检,应尽量避免出现人为现象;根据检查的目的进行必要的处理;标本处理原则

上要满足组织化学、电镜和生物化学检查的要求;例如,线粒体异常需要另外保留分离线粒体

的样品;如果需要做去皮纤维skinnedfiber或破膜纤维检查,需要将标本保存在缓冲液中;

组织化学检查

活检的肌肉标本要用生理盐水浸湿的纱布包裹,放入玻璃瓶内,纱布应该稍微挤干些,避

免水分过多,水分过多容易肌肉膨胀;样品直接暴露在空气中很容易干燥;干燥的样品肯定会

出现人为现象,影响制片和诊断;操作过程中尽量避免产生人为现象;

一般活检的肌肉组织直径5mm,长度1cm左右,固定于软木塞上;软木塞可选用小瓶塞直

径1～将肌肉组织竖立在软木塞上,用托辣甘树胶黄蓍树胶直立固定肌肉,切片时使呈横断面;

注意不要将肌肉完全包埋在黄蓍树胶中;

肌肉组织需要骤冷冷冻,不然会产生冰晶;肌肉组织的细胞比较大,特别容易产生冰晶;含

有冰晶的肌肉组织染色后细胞内会出现大小不等的空泡;为了快速冷冻,一般使用液氮-160℃,

丙酮、干冰混合液-90℃;如果将组织直接放入液氮内组织周围产生大量的汽化液泡,产生热隔

断效应,会延迟冷冻速度;所以现在的方法是先将产生气泡较少的异戊烷冷却于液氮中,再将

组织放在充分冷却的异戊烷中进行冻结;

100ml烧杯在颈部系上牵绳,往烧杯中加60～70ml异戊烷,将烧杯轻轻放入液氮中;为了使

异戊烷冷却均匀,用搅拌棒或镊子不断搅拌异戊烷,开始时液氮因激烈汽化而冒出白烟,而后

逐渐减少;异戊烷充分冷却后,在烧杯中产生白色结晶;

用大镊子夹住软木塞,迅速置入异戊烷中,迅速左右轻柔地晃动;托辣甘树胶粘附固定肌肉

目的就是在充分冷却的异戊烷中轻柔细微地晃动;如果将组织静置在异戊烷中,组织周围异戊

烷的温度升高,包裹在组织周围,不能迅速彻底冻结,组织容易形成冰晶,组织轻微晃动冷冻液

充分流动,使组织迅速冻结,很难形成冰晶;在异戊烷中冷冻20-30秒钟;移入放有干冰的箱中,

放置1小时,使组织周围的异戊烷挥发干净;放入能密封的塑料袋或玻璃瓶中避免组织干燥,

置-70℃冰箱中保存;-70℃以下密封保存最少可保存1年,不会影响组织化学检查结果;我们观

察保存10年以上的标本,染色后的效果和新鲜组织没有明显差别;

恒温冷冻切片冷冻切片机内部的温度-25～-20℃为宜;低于-25℃