SNT 1961.17-2013 出口食品过敏原成分检测 第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1961.17—2013

出口食品过敏原成分检测

第17部分：实时荧光PCR方法

检测羽扇豆成分

Detectionofallergencomponentsinfoodforexport—

Part17:RealtimePCRmethodfordetectinglupincomponents

2013-03-01发布2013-09-16实施

中国家华质量人监督民检检总发布

I

SN/T1961.17—2013

前言

SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：———第1部分：酶联免疫法检测花生成分；

——第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；

第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；

——第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；

——第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；——第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；

——第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；——第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；

————第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；

第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；——第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；

——第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；

——第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；

——第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；

———第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；

——第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；

———第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；——第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；

———第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第17部分。

本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。

本部分主要起草人：陈颖、张舒亚、祝长青、李妮、张佳谊、吕蓉、李想、徐宝梁。

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SN/T1961.17—2013

出口食品过敏原成分检测

第17部分：实时荧光PCR方法

检测羽扇豆成分

1范围

SN/T1961.17的本部分规定了食品中过敏原羽扇豆成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原羽扇豆成分的定性检测。

本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为0.01%(质量分数)。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

过敏原allergen

又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。

3.2

过敏原羽扇豆成分cashewatlergeningredient

本文件中过敏原羽扇豆成分即指羽扇豆特异性DNA片段。

3.3

实时荧光PCRrealtimePCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。

3.4

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。

4方法提要

样品经研磨后，提取DNA,以DNA为模板，采用羽扇16SrRNA和18SrRNA内部转录间隔区核苷酸特异片段特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，判断样品中是否存在过敏原羽扇豆成分。

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SN/T1961.17—2013

5试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

5.1检测用引物(对)序列和探针

羽扇豆成分扩增引物和探针、内参照(真核生物成分)引物和探针详见表1。

表1试验用引物和探针

名称

序列(5-3)

目的基因

内参照5’端引物

内参照3端引物

内参照探针

TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA

AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT

FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAAT