DB42T 2252-2024 牛无绿藻PCR-RFLP检测技术.docx

ICS65.020.30CCS

ICS

65.020.30

CCS

B41

湖 北 省 地 方 标 准

DB42/T2252—2024

牛无绿藻PCR-RFLP检测技术

PCR-RFLPdetectiontechniqueforProtothecabovis

2024-07-29发布 2024-09-29实施

湖北省市场监督管理局 发布

DB42/T2252—2024

DB42/T2252—2024

I

I

目 次

前言 III

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5实验原理 2

6仪器设备 2

7试剂和材料 2

8样品的制备 3

9检测步骤 4

10结果判定 5

11实验室生物安全要求 6

12标准实施及评价 6

附录A（资料性）湖北省地方标准实施信息及意见反馈表 8

DB42/T2252—2024

DB42/T2252—2024

III

III

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由武汉市农业科学院提出。

本文件由湖北省农业农村厅归口。

本文件起草单位：武汉市农业科学院、华中农业大学。

本文件主要起草人：陈夏冰、陈洁、胡长敏、丁一、邵志勇、吴利军、丁明星、万平民、何斌、金尔光、杨文海、童伟文、王肆玖、周源。

本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，电话：027邮箱：hbsnab@126.com；或者牵头起草单位武汉市农业科学院，联系电话：027邮箱：chenxiabing@。对本文件的有关修改意见建议请反馈至武汉市农业科学院，联系电话：027，邮箱：chenxiabing@。

DB42/T2252—2024

DB42/T2252—2024

DB42/T2252—2024

DB42/T2252—2024

PAGE

PAGE1

PAGE

PAGE2

牛无绿藻PCR-RFLP检测技术

范围

本文件规定了牛无绿藻PCR-RFLP检测技术所涉及的实验原理、仪器设备、试剂和材料、样品的制备、检测步骤、结果判定等技术标准。

本文件适用于生鲜乳中牛无绿藻的定性检测、实验室诊断。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范SN/T3902检验检疫二级生物安全实验室通用要求

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

牛无绿藻 Protothecabovis

一种真核生物，绿藻纲，绿藻门，共球藻纲，小球藻目，小球藻科，无绿藻属，能够引起奶牛乳腺炎。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

P.bovis：牛无绿藻（Protothecabovis）DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyriboNucleicAcid）

PIM：无绿藻分离培养基（ProtothecaIsolationMedium）

TSB：胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TryptoneSoybeanBrothMedium）PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

PCR-RFLP：限制性片段长度多态性聚合酶链反应（RestrictionFragmentLengthPolymorphismPCR）

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSaline）

TAE：三乙醇胺四乙酸缓冲液（Tris-acatate-ethyleneDiamineTetraaceticAcidBuffer）

cytb：细胞色素b（cytochromeb）

实验原理

cytb基因在牛无绿藻中相对保守，通过对牛无绿藻cytb基因序列的进行分析，设计了特异性PCR引物，可扩增牛无绿藻，然后通过特异性的限制性酶切反应，鉴定牛无绿藻。

仪器设备

仪器设备包括但不限于：

超净工作台；

高速冷冻离心机；

恒温震荡培养箱；

冰箱；

PCR仪