药化生药学思奇.pptx

MolecularcharacterizationofPlasmodiufalciparumuracil-DNAglycosylaseandits

potentialasanewanti-malarialdrugtarget张思【作者】ThidaratSuksangpleng(9);UbolsreeLeartsakulpanich(6);SaengduenMoonsom(9);SaranyaSiribal(7);UsaBoonyuen(8);GeorgeEWright(9);PorntipChavalitshewinkoon-Petmitr(9)【刊名】MalarJ【影响因子】2013:3.489;2012:3.400;2011:3.191;2010:3.489;2009:2.995;【分区】3区【出版日期】2014

标题分子生物学特性疟原虫恶性疟原虫DNA尿嘧啶糖苷酶和它作为一个新的抗疟疾药物靶标的潜力的研究

背景?疟疾仍是严重危害人类健康的‘超级杀手’,这种传染病每年夺去大约100万人的性命,导致4亿人感染。在热带和亚热带地区,疟疾是常见疾病也是严重的公共卫生问题,统计数字显示,每年全球有几亿人感染疟疾,虽然大多数患者能够治愈,可是仍有一百万人死亡,其中以儿童占了多数。世界卫生组织对疟疾给予密切的关注,遏制疟疾已成为全球奋斗的目标。我国也提出到2015年大部分地区消除疟疾,到2020年全国实现消除疟疾的目标[3]。有效的药物是治疗疟疾的主要方法。

背景然而,疟原虫对抗疟药耐药性和蚊虫对杀虫剂的抗药性已成为实现全球疟疾控制所面临的最主要威胁。以青蒿素为基础的联合疗法(ACT)是目前治疗恶性疟疾这一最致命的疾病形式最强有力的武器,其疗效能达到90%以上,但在柬埔寨和泰国边境地区近期已确认出现青蒿素耐药性。

背景多数参与生物合成与代谢的酶作为抗疟疾药物靶点的参考，却很少有人了解疾病DNA修复系统及其意义。DNA修复是寄生虫生存所必须的，可以防止DNA复制中自负突变和药物诱发突变的基因突变。碱基切除修复（BER）：将DNA中受损碱基迁出，以替换正确碱基。因此，参与碱基切除修复的酶应作为探讨抗疟疾药物的新靶点。

背景DNA糖基化酶是第一个作为BER通路的酶，识别损坏的碱基，是BER过程中非常关键的酶，尿嘧啶DNA糖基酶(UDG)是特定的尿嘧啶切割酶，在此基础上引出胞嘧啶胞氨基作用（每天每细胞发生100~500次）因此这种酶对于防止基因突变有重要作用。研究靶向对疟原虫UDG时应考虑UDG抑制剂，研究了两种UDG抑制剂：UGI和尿嘧啶衍生物。UGI是用以特定分离枯草芽孢杆菌的噬菌体PBS1和2。这种蛋白质可以抑制很多生物的UDG。尿嘧啶衍生物据报道通过充当尿嘧啶的类似物欲氨基酸残基竞争与UDG结合以抑制第一型疱疹病毒。

技术聚丙烯酰胺凝胶电泳作用：分离蛋白质和寡核苷酸特点：具有分子筛效应

技术LC-MS/MS液相色谱-质谱、质谱连用技术采用串联质谱，既能得到分子分离又能得到碎片离子峰，因而可以用来进行定性和定量分析。采用SDS—PAGE分析重组PfUDG，并由LC-MS标识。三个三维结构被塑造。

方法酶活性测定及其生化特性参照限制性DNA内切酶活力测定法的原理(以完全消化DNA带型的最高稀释度为一个活性单位)和应用凝胶成像分析技术，建立了UDG酶活性的非同位素检测新方法，通过琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析，测定底物ss-U或ds-A:U的残留量以测定UDG酶活性．该法简便易行、客观、精密，重复性好，结果显示直观。

方法生化活性

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方法PfUDG与人类UNG动力学常数的比较底物有ss-U和ds-A:U

方法枯草噬菌体UGI对天然和重组PFUDG的抑制作用

方法研究了12脲嘧啶衍生物对PfUDG活性的抑制作用

完