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EXPERIMENT5
ACID-FASTSTAININGANDMORPHOLOGICALOBSERVATIONOFSPORE-FORMING
GRAM-POSITIVEBACILLI
ACID-FASTSTAININGOFMYCOBACTERIUM.TUBERCULOSIS
BIOLOGICALCHARACTERISTICSOFT.Bslim/slender,straightorslightlycurved,sometimesbranchedbacilli.appearirregularforms:granularandfilamentouspossessacomplex,lipid-richcellwall.obligateaerobes,growmuchmoreslowlythanmostotherbacteria(generationtime:18~24h).morehighlyresistanttosomephysicalandchemicalagentsthanmostotherbacteria.
MycobacteriumtuberculosisAsanobligateaerobicorganismM.tuberculosiscanonlysurviveinanenvironmentcontainingoxygen.Thisbacteriumrangesinlengthbetween2~4microns,andawidthbetween0.2~0.5microns.
Mycobacteriumtuberculosisbacteriausingacid-fastZiehl-Neelsenstain;Magnified1000X.
Theacid-faststainsdependontheabilityofmycobacteriatoretaindyewhentreatedwithmineralacidoranacid-alcoholsolutionsuchastheZiehl-NeelsenstainsthatarecarbolfuchsinmethodsspecificforM.tuberculosis.
ACID-FASTNESSOFM.TUBERCULOSISThecellwallofmycobacteriahaveaveryhighlipidconcentration,includingmycolicacid,sulfatide,etc.Theycan’tbeeasilystainedbyconventionalmethods.?Harshtreatmentsareusedtostainthem.Oncestained,itisdifficulttoremovethedyebyvigorousdecolorizingagentsuchasacidalcohol.Thepresenceofmycolicacidandotherlipidsoutsidethepeptidoglycanlayermakesmycobacteriaacid-fast.
Inadditiontopeptidoglycan,theacid-fastcellwallofMycobacteriumcontainsalargeamountofglycolipids,especiallymycolicacids.Thepeptidoglycanlayerislinkedtoarabinogalactan(D-arabinoseandD-galactose)whichisthenlinkedtohigh-molecularweightmycolicacids.Thearabinogalactan/mycolicacidlayerisoverlaidwithalayerofpolypeptidesandmycolicacidsconsistingoffreelipids,glycolipids,andpeptidoglycolipids.
THREEREAGENTSINACID-FASTSTAIN
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