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痰及呼吸道标本检验程序

1.检验目的：检出痰及支气管灌洗液中的病原微生物，进行体外抗生素敏感试验，为临床诊断与

抗生素选择提供依据。

2.范围:适用于呼吸道标本。

3.程序原理：根据涂片、培养基上菌落形态特点、优势菌群分布选择可能的病原菌进行生化反应

鉴定和药敏试验，通过微生物分析手段，为临床提供诊断依据和抗生素选择。

4.所用设备：VITEK2全自动细菌鉴定/药敏分析系统、CO培养箱、II级生物安全柜、厌氧箱、

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恒温培养箱、显微镜、酒精灯、接种环、移液器、吸头。

5．试剂：血液培养基、巧克力培养基、麦康凯平板培养基、沙保弱培养基及根据临床需求增加特

殊的培养基、革兰染色液、抗酸染液、VITEK2鉴定卡、手工生化鉴定试剂、K-B药敏纸片、MIC

药敏板、无菌盐水、反应板、各种培养基、触酶试剂、氧化酶试剂、凝固酶试剂等。

6.标本采集：见临床微生物标本采集和送检程序（YLJY-WSW-PF-6-8）。

7.检验程序：

7.1直接涂片检查呼吸道标本必须做涂片检查，可确定标本是否来自下呼吸道，初步判定是否

有病原菌存在、细胞增生情况以及病原菌与细胞的关系。

7.1.1痰涂片及标本来源判断（1）挑取脓性或血部分制备2张涂片，一张做革兰染色，另一张

根据需要做其它染色。（2）革兰染色低倍镜观察白细胞和上皮细胞数量：白细胞＜10，上皮细胞

＞25，确定为上呼吸道标本，不宜做培养，电话通知主管医生要求重留标本。如果临床坚持继续，

在申请单和结果报告单注明；若白细胞＞10，上皮细胞＜25时，要参照高倍镜下的情况进行区分：

①有少量扁平上皮细胞、少量白细胞、3种以上细菌，说明为唾液，不宜培养。②见数量不等的

白细胞或纤毛柱状上皮细胞或二者同在，有一种细菌或两种，记录结果，同时进行培养。（3）标

本证实来自下呼吸道后，油镜观察细菌着色、形态及排列，有经验技师可通过镜检做出初步病原

学诊断，如葡萄球菌、肺炎链球菌、真菌。

如果临床医生坚持对不适宜标本进行培养，要特别注明。

判断是否适宜培养的痰显微镜检查结果见下表

分类白细胞上皮细胞判断

A2510合格

B2525合格

C1025不合格

7.1.2一般细菌涂片检查：革兰染色镜检，跟据着色、形态及排列大致可以初步推断菌属或种，

如见到革兰阳性球菌、呈堆或葡萄状排列，疑似葡萄球菌；如见到瓜子形态、矛头状、尖端相背

的成双排列并有荚膜的革兰阳性球菌疑似肺炎链球菌等。

7.1.3抗酸染色涂片检查：结核分枝杆菌抗酸阳性（樱红色）、细长略弯、有时呈分枝状、多成

堆排列。

抗酸杆菌报告方式

－:全视野或（100个视野）未找到抗酸杆菌

+:全视野发现3～9个

++:全视野发现10～99个

+++:每视野发现1～9个

++++:每视野发现10个以上

全视野发现1-2个时报告抗酸菌个数

7.1.4放线菌及奴卡菌涂片检查：将痰液用生理盐水反复洗涤数次，如含血液则加蒸馏水溶解红

细胞，然后挑取黄色颗粒（硫磺颗粒）或不透明的着色斑点，置玻片上覆以盖玻片，轻轻挤压，

置高倍镜下观察其结构，如见中央为交织的菌丝，其末端粗杆形呈放线状排列。然后揭去盖玻片，

自然干后做革兰及抗酸染色镜检。如查见中央部分菌丝为革兰阳性，而四周放射的末梢菌丝为革

兰阴性，抗酸染色为非结核性者，可报告：找到疑似放线菌。如查见革兰染色反应与放线菌相同，

但抗酸染色为弱抗酸性（正常脱色时间红色完全退色，故脱色时间要短），可报告：找到疑似奴卡

菌。

7.1.5厌氧菌涂片检查：涂片染色同一般细菌，镜检时注意有芽胞的革兰阳性杆菌，可能是梭状

芽胞杆菌属。如见芽胞位菌体不膨大，排列呈竹节状，要注意炭疽芽胞杆菌、两端尖的革兰阳性

杆菌，可能为梭杆菌及革兰阴性无芽胞杆菌；如痰有恶臭可能有拟杆菌，根据细菌的着色、形态、

排列做出