《基因工程的原理和技术》复习课件.pptVIP

目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。受体细胞不同，导入方法不同。受体细胞方法植物细胞①农杆菌转化法：目的基因插入Ti质粒的TDNA→农杆菌→导入植物细胞→稳定维持和表达②基因枪法是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高③花粉管通道，这是我国科学独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法受体细胞方法动物细胞显微注射法：含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物微生物细胞Ca2＋处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子→目的基因随受体细胞的繁殖而复制例四：下列关于目的基因导入受体细胞的描述不正确的是()A．基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济有效B．显微注射技术是转基因动物中采用最多的方法C．大肠杆菌最常用的转化方法是使细胞的生理状态发生改变D．农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法解析：目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，该方法比较经济有效，还有基因枪法和花粉管通道法；目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法；大肠杆菌细胞最常用的转化方法就是用钙离子处理细胞，使细胞的生理状态发生改变，完成转化过程。答案：A目的基因的检测与鉴定检测转基因生物的上的目的基因，采用方法是DNA分子杂交；检测目的基因是否转录出，采用方法是分子杂交法；检测目的基因是否翻译成蛋白质，采用方法是；个体生物学水平的鉴定，如抗虫、抗病的实验等。接种染色体mRNA抗原—抗体杂交法一是目的基因导入受体细胞的成功率很低；二是即使目的基因已导入受体细胞，但在受体细胞中成功表达的几率也很低，故最后需要从分子水平、个体水平等方面进行目的基因的检测与鉴定。类型步骤检测内容方法结果显示分子水平检测第一步目的基因是否进入受体细胞DNA分子杂交(DNA和DNA之间)是否成功显示出杂交带分子水平检测第二步目的基因是否转录出mRNA分子杂交技术(DNA和mRNA之间)同上第三步目的基因是否翻译出蛋白质抗原—抗体杂交同上个体水平鉴定需要做抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的活性比较，以确定二者的功能活性是否相同等例五：下列技术中不是依据DNA分子杂交原理的是()A．检测目的基因是否导入了受体细胞B．检测目的基因是否转录了mRNAC．检测目的基因是否翻译合成蛋白质D．快速灵敏地检测饮用水中病毒的含量解析：DNA分子杂交就是不同来源的DNA分子的单链按碱基互补配对原则结合在一起，形成杂合双链的过程。B项也是利用了分子杂交技术(DNA与mRNA之间杂交)。检测目的基因是否翻译合成蛋白质依据的是抗原—抗体杂交原理，未用到DNA分子杂交原理。答案：C退出学习目标知识点一自主预习·自我领悟知识点二自主预习·自我领悟知识点三自主预习·自我领悟知识点四自主预习·自我领悟难重聚焦·质疑解惑第二节基因工程的原理和技术1.简述基因工程的原理；2.描述基因工程基本步骤的几个步骤；3.举例说出筛选含有目的基因的受体细胞的原理。获取目的基因1．从基因文库中获取目的基因：将含有某种生物的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的，称为基因文库。基因文库可大可小，如果它含了一种生物所有的基因，就叫；如果它只包含一种生物的一部分基因，就叫，如。不同基因不同基因基因组文库部分基因文库cDNA文库2．利用PCR技术扩增目的基因：PCR技术是一项在生物体外特定DNA片段的核酸合成技术(1)原理：利用原理，将基因的核苷酸序列不断加以复制，使其呈指数方式增加。指数扩增约为2n(n为扩增循环的次数)。(2)条件：已知目的基因的序列、、、。复制DNA复制核苷酸引物模板DNADNA聚合酶(3)过程：目的基因DNA受热变性后解链为，与引物结合，然后在的作用下进行延伸形成DNA。3．化学合成目的基因：如果比较小，核苷酸序列又，也可以利用DNA合成仪化学合成