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分子生物学技术总结

姓名：梁潇班级：2班学号：1080800066

一、核酸/蛋白分离技术

1．DNA分离：破碎细胞→抽提蛋白质→DNA沉淀→乙醇洗除盐→琼脂糖凝胶电泳检测

用细胞裂解液裂解细胞膜，收集细胞核，加入SDS破裂核膜，用蛋白酶K使核蛋白降解成

小片段并从DNA是上解离下来，经苯酚、氯仿抽提去除蛋白质，无水乙醇沉淀DNA，75%

乙醇洗涤DNA沉淀，真空干燥后，溶解于TE缓冲液中即得到相对分子量高的DNA。

2．RNA分离：抑制RNase→抽提去蛋白质→DNase消化DNA→甲醛变性琼脂糖凝胶电泳

3．蛋白分离：

通过带电的溶质分子与离子交换层析介质中可交换离子进行

交换而达到分离纯化的方法，也可以认为是蛋白质分子中带

电的氨基酸与带相反电荷的介质的骨架相互作用而达到分离

离子交换层析

纯化的方法。离子交换层析法主要依赖电荷间的相互作用，

利用带电分子中电荷的微小差异而进行分离，具有较高的分

离容量。几乎所有的生物大分子都是极性的，都可使其带电，

所以离子交换层析法已广泛用于生物大分子的分离、中等纯

化及精制的各个步骤中。

（1）层析法

利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从

而达到分离的目的。将可亲和的一对分子中的一方以共价键

形式与不溶性载体相连作为固定相吸附剂，当含混合组分的

样品通过此固定相时，只有和固定相分子有特异亲和力的物

质，才能被固定相吸附结合，性无关组分随流动相流出。改

亲和层析

变流动相组分，可将结合的亲和物洗脱下来。亲和层析中所

用的载体称为基质，与基质共价连接的化合物称配基。具有

专一亲和力的生物分子对主要有：抗原与抗体，DNA与互补

DNA或RNA，酶与底物、激素与受体、维生素与特异结合蛋

白、糖蛋白与植物凝集素等。

（2）电泳分离：聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶，

在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及

其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。而SDS仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以

分开蛋白质。此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷

和分子形状无关。

应用：分离蛋白质和寡糖核苷酸

二、基因克隆技术

1．PCR：在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促

和反应，P