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流式细胞仪应用——利用PI检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)--第1页
流式细胞仪应用——利用PI检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)
本文主要讲述PI单染检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)PI（碘
化丙啶）染色特点：一是能够与双链DNA/RNA螺旋的大沟部位结合，
二是不能通过功能正常的完整细胞膜。基于以上特性，目前主要有两
大方面的应用，配方也不同：细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)
一方面的应用是检测细胞周期，检测细胞周期时，为了保证所有的细
胞都能染上PI，因此要将细胞用乙醇固定，并加入TritonX-100，以
增加膜的通透性；同时由于DNA使细胞的粘附性增大，加入EDTA以
降低细胞粘附性；为了消除RNA的干扰，要加RNAase。由于要鉴定
DNA含量，因此PI染料必须过饱和，所以PI终浓度很高，一般50ug/mL。
由于晚期凋亡细胞DNA断裂形成亚二倍体峰，因此可同时检测凋亡。
另一方面的应用是检测膜通透性（凋亡），由于PI不能进入完整的活
细胞膜，因此一般认为PI染色阳性的细胞是死细胞。AnnexinV/PI
凋亡检测试剂盒中就是这种染液，它的作用是鉴定死细胞，从而与凋
亡细胞区分开来。它的配制就是将PI溶于PBS，终浓度较低，一般
2.5ug/mL。
所需试剂：
1、PI染液：
用于检测细胞周期的PI配制如下：
方法一：10×PI配制方法,用时用PBS稀释至工作液：
5mgPI
0.1mlTritonX-100
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3.7mg--EDTA
10mlPBS
2、RNaseA——2mg
方法二,直接配制PI工作液：
PI5mg
RNaseA——2mg
1.0%TritionX-100——0.25ml
枸椽酸钠——100mg
生理盐水——65ml
调pH值至7.2-7.5
加蒸馏水至100ml,棕色瓶分装，保存在4℃
操作步骤
1.细胞培养
铺细胞至6孔板或者35mm培养皿，约4－5*10e5cells/well,如果要
加药物，在此时可以加以不同种或不同浓度的药物。流式侧细胞周期
对细胞的种板密度非常讲究，如果密度过高就会出现接触抑制，所以
建议刚开始做预试验时可以种个细胞密度梯度。
2细胞收集，细胞培养至一定时间后，如果是贴壁培养的细胞，常规
胰酶消化，PBS洗2-3次，制成单细胞悬液，并调整细胞数量至1－
6
5*10cells/ml。
3.细胞固定
3.1.加入3ml预冷PBS重悬细胞，800rpm×5min，吸净上清。
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3.2.加入500ulPBS，轻轻重悬细胞，使细胞分离为单个，逐滴加入预
冷的100%乙醇（-20℃）1.5ml，使其终浓度为75%，-20℃放置过
夜固定，最长可以放置1周左右。
注意：固定细胞时，确保PBS悬浮细胞为单个，加入无水乙醇的时候
要慢速，保证逐滴。细胞保存在℃也可以。
4
4.细胞标记
4.1.取出固定的样品
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