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免疫组化应用指南

目录

简介4

组织处理、固定和切片5

抗原修复7

封闭9

阻断内源性酶10

-过氧化物酶封闭10

-碱性磷酸酶封闭10

一抗11

-直接检测与间接检测11

-选择一抗11

-抗体特异性11

-经IHC验证12

-克隆性12

检测和信号放大系统13

-显色与荧光检测13

-酶和显色剂14

多色IHC16

复染17

IHC的对照19

-抗原（组织）对照19

-试剂对照19

IHC实验疑难解答20

-无染色20

-高背景21

-非特异性染色22

-组织形态不清晰或受损22

3

简介

免疫组化（IHC）利用抗体检测组织切片中蛋白和其他抗原的定位。抗体-抗原的相互作用通过

酶底物显色检测或通过荧光染料进行荧光检测。

虽然IHC在定量方面不如蛋白质印迹或ELISA，但是它可以提供完整组织背景下蛋白定位的宝贵

信息。蛋白表达谱对病理学家具有极大价值，也可作为重要的诊断工具。

IHC实验成功的关键在于稳定、优化且可重复的染色方案，而该方案应使用优质的特异性试剂。

IHC资源

/IHC-kits-and-reagents

/IHC-primary-antibodies

/IHC-secondary-antibodies

4

组织处理、固定和切片

组织固定可保存抗原，防止采集的组织自溶和坏死。组织包埋可在切片过程中对组织提供支撑，

使切片更坚实。

准备IHC实验的第一步是决定如何制备组织切片。最常见的方法是石蜡包埋。也可以选择冰冻

切片和漂片——每种方法都有各自的优势和局限性（见表1）。

样本固定是组织处理的关键步骤，也是阻止抗原、细胞和组织降解的关键。10%的福尔马林缓

冲溶液以及4%的甲醛（或多聚甲醛）是典型的固定剂——两种溶液几乎相同；福尔马林是40%

的甲醛溶液。

收集样本后，快速、彻底地固定或冷冻样本非常关键，取材时务必确保样本不会大到无法完全

固定或快速冷冻。

组织处理资源

/tissue-processing

5

表1.IHC石蜡切片vs冰冻切片vs漂片。

石蜡包埋冰冻组织漂片

组织

固定包埋前：甲醛切片前或切片后：甲醛、切片前：

甲醇、乙醇或丙酮甲醛

包埋/冷冻组织脱水、透明化处理将组织浸没在液氮、异戊不需要包埋

后，加入石蜡（预热到烷中冷冻或将样本埋入干

60℃），放置过夜。冰中冰冻。

检测磷酸化等翻译后修饰

时，常使用速冻方式

切片切片机冰冻切片机振动切片机

储存室温下储存多年。-80℃下储存1年（-190℃置于冷冻保护剂中，在-

下储存时间更长）。20℃下储存，或者4℃下