细菌药敏试验及耐药机制研究进展.ppt

第31页,共49页，星期六，2024年，5月第32页,共49页，星期六，2024年，5月第33页,共49页，星期六，2024年，5月第34页,共49页，星期六，2024年，5月三、耐药表型的检验1、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌中ESBLs检测的筛选与确证试验纸片法：初筛和确证液体稀释法：初筛和确证第35页,共49页，星期六，2024年，5月第36页,共49页，星期六，2024年，5月第37页,共49页，星期六，2024年，5月第38页,共49页，星期六，2024年，5月第39页,共49页，星期六，2024年，5月第40页,共49页，星期六，2024年，5月第41页,共49页，星期六，2024年，5月3.D试验-克林霉素诱导耐药试验（1）机制：对大环内酯耐药的葡萄球菌可能有天然或诱导性对克林霉素的耐药[通过erm基因编码的23SrRNA甲基化也称为MLSB（大环内酯、林可和B型链阳霉素）耐药]，或只对大环内酯类耐药（由msrA基因编码的外排机制）。（2）方法：MHA或血平板，纸片相邻试验，对于葡萄球菌，距红霉素纸片（15μg/片）边缘15~26mm处放置克林霉素纸片(2μg/片)来进行检测；对于β-溶血链球菌，将克林霉素纸片(2μg/片)和红霉素纸片（15μg/片）贴在相邻的位置，纸片边缘相距12mm。第42页,共49页，星期六，2024年，5月（3）结果判读：35℃空气，16-20小时孵育后，克林霉素抑菌环不出现“截平”现象，应报告分离株对其敏感。邻近红霉素纸片侧克林霉素抑菌环出现“截平”现象（称为“D”抑菌环），提示存在可诱导的克林霉素耐药，应报告分离株对其耐药，在报告中应注明“通过诱导克林霉素耐药试验，推测此菌株对克林霉素耐药，克林霉素对某些病人可能仍有效”；若无“截平”现象，则应报告菌株对克林霉素敏感。第43页,共49页，星期六，2024年，5月第44页,共49页，星期六，2024年，5月葡萄球菌对大环内酯类抗生素耐药机制研究：一、由msrA基因介导的主动外排机制，即M型耐药；二、抗生素作用靶位的改变，即由erm基因编码的RNA甲基化酶对细菌核糖体50S亚基23SrRNA进行特定核苷酸残基甲基化，使药物与靶位的结合能力下降，导致对具有相同靶位的大环内酯类、林可酰胺类、链阳菌素B三类药物同时耐药，临床称为MLS型耐药。体外药敏试验又可将MLS型分为结构型（cMLS型）和诱导型（iMLS型）；cMLS型为红霉素和克林霉素均耐药；iMLS型红霉素耐药、克林霉素敏感。第45页,共49页，星期六，2024年，5月4.肠球菌高水平氨基糖苷类耐药和万古霉素耐药检测

（1）肠球菌高水平氨基糖苷类耐药和万古霉素耐药液体稀释法琼脂稀释法、筛选试验

第46页,共49页，星期六，2024年，5月第47页,共49页，星期六，2024年，5月第48页,共49页，星期六，2024年，5月*感谢大家观看第49页,共49页，星期六，2024年，5月关于细菌药敏试验及耐药机制研究进展一、药敏试验种类1、纸片扩散法2、稀释法稀释法包括宏量肉汤稀释法(macrodilutiontest)、微量肉汤稀释法(microdilutiontest)、琼脂稀释法(agardilutiontest)。3、E-test法第2页,共49页，星期六，2024年，5月第3页,共49页，星期六，2024年，5月细菌药敏试验-宏量稀释法Minimalinhibitoryconcentration(MIC)Referencemethod.Addstandardinoculumtodilutionsofantibiotic.Incubateovernight.MICislowestconcentrationthatinhibitsgrowth(canalsobeperformedbyagardilution).Interpretation(SorR)isbasedonachievabledruglevels104cfu4210.50.250.120mg/ml第4页,共49页，星期六，2024年，5月微量液体稀释法第5页,共49页，星期六，2024年，5月细菌药敏试验-E-test法E-testStripscontainingagradientofantibioticareplacedonlawnofbacteriaandincubatedovernight.MICisdeterminedatpoi