细胞工程第5章 单克隆抗体.pptVIP

人淋巴细胞抗原筛选产生特异克隆RT-PCR轻链重链基因转印至NC膜DNA重组组合抗体库E.coli随机表达组合抗体库噬菌体抗体库技术1.噬菌体显示：指将蛋白分子或肽段基因克隆到丝状噬菌体的基因组DNA中，使噬菌体表面表达该异源性分子，主要特点是在同一病毒颗粒内将特定分子的基因型和表型统一，在噬菌体表面表达特定蛋白，在该噬菌体核心DNA中含有该蛋白的基因。2.噬菌体抗体：将抗体分子片段与噬菌体外壳蛋白融合，使之表达在噬菌体表面，形成噬菌体抗体，将全套抗体可变区基因，组装到表达载体，其抗体表达到噬菌体表面，得到噬菌体抗体。噬菌体抗体文库技术

噬菌体展示技术

Winter等在1994创建了噬菌体抗体库（repertoireofantibodiesdisplayedonphages）技术,或称噬菌体抗体技术（Phagedisplay），克服了人体不能随意免疫的缺点，而且不用人工免疫动物和细胞融合技术，完全用基因工程技术制备人源性抗体。噬菌体抗体文库5.2人源性单克隆抗体的制备多克隆抗体鼠源单克隆抗体人-鼠嵌合抗体人源化抗体全人源抗体鼠源单抗临床应用的障碍血清半衰期短，20h抗原抗体结合力、亲和力不够募集效应细胞产生副作用HAMA反应：8－10天出现，20－30天高峰,加速单抗清除。过敏休克HAMA反应

HumanAnti-MouseAntibodies鼠来源的单抗在人体内是外源物质，很可能会产生人体免疫系统对它的排斥反应：产生抗鼠的抗体，叫做人抗鼠抗体（HAMA）反应。HAMA反应对鼠源的单抗分子有着较强的破坏作用，严重影响了鼠源单抗在人体内的功效，所以非常有必要改进鼠源单抗。抗体研究的世代第一代多克隆抗体第二代单克隆抗体第三代基因工程抗体抗体的结构及其多样性轻链重链免疫球蛋白的基本结构四条链对称结构互补决定区complementaritydeterminingregions(CDR)小鼠抗体嵌合抗体重构抗体人源抗体5.2人源性单克隆抗体的制备5.2.1EB病毒转化技术5.2.2细胞工程单克隆抗体技术1人-鼠杂交瘤单克隆抗体2人-人杂交瘤单克隆抗体3EB病毒转化-融合技术4转基因动物制备单克隆抗体5重症联合免疫缺陷小鼠制备单克隆抗体5.2.3人单抗制备技术的发展（新基因工程技术）5.2.1EB病毒转化技术EB病毒（epstein-barrvirus,EBv）是epstein和barr于1964年首次成功地将burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，故名。EB病毒的形态与其他疱疹病毒相似。EB病毒仅能在B淋巴细胞中增殖，可使其转化，能长期传代。EB病毒转化淋巴细胞5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

1人-鼠杂交瘤单克隆抗体人脾细胞＋鼠骨髓瘤细胞5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

2人-人杂交瘤单克隆抗体人脾细胞＋人骨髓瘤细胞细胞种类少5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

3EB病毒转化-融合技术利用EB病毒转化B淋巴细胞为永生细胞与鼠骨髓瘤细胞融合5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

4转基因动物制备单克隆抗体人抗体基因(除CDR)导入小鼠胚胎转基因小鼠抗原免疫转入人的Ig基因组免疫动物人抗体基因敲除小鼠将小鼠Ig基因敲除，转染人Ig基因，在小鼠体内产生人Ab，再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体5.2.2细胞工程单克隆抗体技术

5重症联合免疫缺陷小鼠制备单克隆抗体SCID:severecombinedimmunodeficiencymouse既无有功能的T细胞也无B细胞的小鼠,对异源移植物不产生任何排斥反应,可以作为良好的载体系统用于医学及生物学各个领域的研究,但极易感染病菌,饲养和操作管理十分复杂。SCIDSCID:SevereCombinedImmunodeficiency1)TumorsfromotherspeciesareeasilytransplantedintoSCIDmiceandwillgrowwithoutbeingrejected.2)SCIDmiceareevenmoreimmunodeficientthannudemice.