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MALDI-TOFMS鉴定病原微生物临床应用专家共识

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）技术在微生物学检验中具有检测速度快、鉴定准确率高、检测成本低、检测通量高、可鉴定菌种类型广泛等特点。随着微生物质谱技术的快速发展和广泛应用，MALDI-TOFMS的规范化使用及管理、技术要点等内容亟须广泛普及，以更好推动该技术在临床微生物学实验室的高效使用。专家组通过对国内外相关指南共识及文献的阅读和讨论，结合我国MALDI-TOFMS的临床应用现状，就临床实际工作中存在的常见问题，对影响或决定MALDI-TOFMS技术规范化使用、结果准确解读、科研探索等方面存在的问题进行了反复和深入的讨论，最终形成本共识。随着实践经验的不断总结和临床研究的不断深入，编写组将不定期对共识内容进行更新和完善。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assistedlaserdesorptionionizationtime-of-flightmassspectrometry，MALDI-TOFMS）是一种新型软电离有机质谱技术，用于分析生物分子（如DNA、蛋白质、多肽、糖类等）和大分子量的有机分子［1］，使得微生物蛋白质指纹图谱进行菌种鉴定成为可能。随着MALDI-TOFMS仪器临床使用日渐广泛，越来越多的临床问题需要规范。本专家共识旨在对日常使用MALDI-TOFMS进行病原微生物鉴定的常见问题给出详细建议，仅供临床微生物学实验室参考。

本专家共识制定过程：本共识由郝晓柯教授、应斌武教授和鲁炳怀教授牵头，确定执笔专家和汇总专家，召开共识启动会，讨论会和定稿会。搜集临床问题，专家讨论归纳出22个问题，执笔专家分别回答擅长问题，汇总后专家会议讨论确定内容，并最终确定13个实用性问题。涵盖了MALDI-TOFMS应用的“概述、标本制备、结果分析与展望”4部分。执笔专家通过大量文献调研并结合使用经验分别对共识内容进行了撰写和互审，形成“共识讨论稿”。通过函审形式由编写专家形成了40余版“共识修改稿”。在此基础上，专家组共同凝练出13个实用性问题并形成13条推荐意见纳入共识讨论内容中。同时制定了共识调查问卷，针对每个推荐意见征集专家建议，通过函审形式调查。调查结果的统计分为推荐、有条件推荐、不推荐和弃权。推荐和有条件推荐统计为推荐意见，征集到47位专家的建议统计后形成了最终的推荐意见。综合评审和调查结果，执笔专家形成“共识审阅稿”，同时由审阅组专家进行审核。最终结合专家反馈的建议和意见对文章完成修改后形成本共识。

一、概述

问题1?MALDI-TOFMS进行病原微生物鉴定的优势和局限性有哪些？

推荐意见1推荐MALDI-TOFMS作为细菌、酵母及酵母样真菌鉴定的首选方法之一。

MALDI-TOFMS用于病原微生物鉴定，与临床常用微生物鉴定方法包括菌落和镜下形态学、生化、免疫学以及基因测序相比，具有明显的优势［2,3］。

1.快速、简便、通量高：前处理及上机操作步骤操作简单，短时间内即可完成多标本检测。

2.准确度高：MALDI-TOFMS的鉴定准确率为90.0%~95.0%，显著高于微生物生化鉴定系统［4］。MALDI-TOFMS检测的是保守且具有种特异性的核糖体蛋白，对近缘菌种的区分能力较传统方法更强，尤其对有重要临床意义的菌种鉴定有明显优势。例如对凝固酶阴性葡萄球菌和引起心内膜炎的HACEK群菌种［5］。

3.鉴定范围广：相比生化鉴定方法，MALDI-TOFMS能鉴定更多的临床菌种，除了常见细菌，还适用于分枝杆菌、酵母及酵母样真菌、丝状真菌、专性厌氧菌等［6］。根据行业标准《医用质谱仪第2部分：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪》（YY/T1740.2-2021），商业参考谱图数据库应包含≥700种微生物［7］。

4.检测成本低：试剂耗材（靶板、试剂、校准品）少、成本低。

尽管MALDI-TOFMS有许多优势，但也需要注意该技术在微生物鉴定方面的局限性，主要包括以下几个方面：（1）部分近缘菌种鉴定易混淆。近缘菌种由于核糖体蛋白的内在相似性，使得谱图难以区分，包括但不限于大肠埃希菌/志贺菌属、蜡样芽孢杆菌复合群、肺炎链球菌和缓症链球菌群、洋葱伯克霍尔德菌复合群、鼻疽/类鼻疽伯克霍尔德菌、无色杆菌属、弗劳地柠檬酸杆菌复合群、阴沟肠杆菌复合群、沙门菌属、结核分枝杆菌复合群［6］。随着数据库的扩展和算法的改进，区分以上近缘菌种的能力会逐步改善。各制造商的易混淆菌种清单可参考相应的产品说明书。（2）混合菌鉴定困难。尽管有不少研究尝试对混合培养物进行鉴定［8,9,10］，但尚无可靠的混合菌鉴定系统投入临床使用，目前的MALDI-TOFMS准确鉴定仍需以获得纯菌落为前提。（3）仅适用于可体外培养并