细菌内毒素和热原检查法.ppt

加样结束后，用封口膜封口，轻轻混匀，避免产生气泡，连同试管架放入37摄氏度水浴中，试管架保持水平状态，保温60±2分钟.第31页,共48页，星期六，2024年，5月结果判定：将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180°时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（＋）；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。第32页,共48页，星期六，2024年，5月鲎试剂灵敏度复核

如最大2.0λ浓度管均为阳性，最低浓度0.25λ4管均为阴性，阴性对照为阴性，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果（λc）。λc＝lg-1(ΣX/4)式中X为反应终点浓度的对数值（lg）。反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后四个呈阳性的结果浓度。第33页,共48页，星期六，2024年，5月结果记录阴性0.50.250.1250.0625-++---++---++---+---第34页,共48页，星期六，2024年，5月举例计算内毒素稀释液浓度d(EU/ml)X(lgd)0.25-0.602060.25-0.602060.25-0.602060.5-0.30103第35页,共48页，星期六，2024年，5月举例计算∑X=﹣2.10721λс=lg-1(-2.10721/4)=0.297测定值在标示值的50%——200%之间，所标示灵敏度可被确认，此批鲎试剂可用于供试品的细菌内毒素检查。第36页,共48页，星期六，2024年，5月内毒素限值的确定一次性使用输液器内毒素限值为20EU/套（GB/T14233.2-2005)供试品细菌内毒素的检查第37页,共48页，星期六，2024年，5月供试品细菌内毒素的检查供试品溶液的制备每批输液器取3套，管内腔注入细菌内毒素检查用水10mL，反复荡洗5次后，两端封闭，置37℃下2h，将腔内的液体倒入一无菌无热原玻璃容器内。第38页,共48页，星期六，2024年，5月举例：所用鲎试剂标示灵敏度为0.25EU/ml,则阳性对照溶液的细菌内毒素浓度为0.5EU/ml.阳性对照溶液的制备用细菌内毒素检查用水制成2λ浓度的细菌内毒素溶液。试剂制备第39页,共48页，星期六，2024年，5月鲎试剂制备在制备供试品溶液、内毒素标准溶液的同时，取0.1ml/支的鲎试剂6支，手指轻弹瓶壁，使颈部瓶壁上的粉末落入瓶内，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%乙醇棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内，加入0.1ml/支水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。若使用的鲎试剂的规格不是0.1ml/支时，按标示量加入BET水复溶，将溶解后的鲎试剂液混匀后每0.1ml分配到10×75mm凝集管中，要求至少分配6管备用。第40页,共48页，星期六，2024年，5月供试液的稀释使用鲎试剂的灵敏度标示值小于供试品的细菌内毒素限量时，用检查用水将供试液稀释后进行试验，公式如下：供试液稀释倍数=X/λX——供试品的细菌内毒素限量λ——使用鲎试剂的灵敏度标示值第41页,共48页，星期六，2024年，5月加样取装有0.1ml鲎试剂溶液的10×75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿8支。2支加入0.1ml按最大有效稀释倍数稀释的供试品溶液作为供试品试管。2支加入0.1ml2λ浓度的内毒素溶液作为阳性对照。2支加入0.1mlBET水作为阴性对照。2支加入0.1ml含2λ浓度的内毒素的供试品溶液作为供试品阳性对照第42页,共48页，星期六，2024年，5月加样编号内毒素浓度/配制内毒素的溶液平行管数A无/供试品溶液2B2λ/供试品溶液2C2λ/检查用水2D无/检查用水2注：A为供试品溶液；B为供试品阳性对照；C为阳性对照；D为阴性对照第43页,共48页，星期六，2024年，5月将试管中溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37±1℃水浴或适宜恒温器中，试管保持水平状态保温60±2分钟。保温和拿取试管过程应避免震动。第44页,共48页，星期六，2024年，5月结果判断将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180°时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（＋）；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。第45页,共48页，星期六，2024年，5月结果判定阳性对照2管应均为（＋），供试品阳性对照2管应均为（＋），阴性对照2管应均为（－）。否则实验无效。第46页,共48页，星期六，2024年，5月结果判定供