细菌的生化试验.ppt

过氧化氢酶试验【试剂与器材】1、菌种金黄色葡萄球菌2、试剂3%过氧化氢3、器材载玻片、无菌移液器吸头、酒精灯、火柴、超净工作台第29页,共42页，星期六，2024年，5月过氧化氢酶试验【操作步骤】1、在载玻片中央滴加一滴3%过氧化氢。2、用无菌移液器吸头蘸取少量细菌，在3%过氧化氢中混匀。【结果】观察气泡的产生情况。可以看见在吸头上金黄色葡萄球菌菌苔周围，产生大量气泡，为过氧化氢酶阳性。如果菌苔周围无气泡产生，为过氧化氢酶阴性。第30页,共42页，星期六，2024年，5月过氧化氢酶试验【注意事项】1、普通金属接种环可能与过氧化氢反应，形成气泡，造成假阳性，因此必须使用铂丝接种环或塑料、玻璃材质的工具。2、从血液琼脂平板上挑取菌落时千万小心，不要碰到培养基，因红细胞中有过氧化氢酶，即使一点点也会造成假阳性。3、过氧化氢试剂现配现用。第31页,共42页，星期六，2024年，5月第五复合生化试验一．KIA试验：成分：KIA主要用糖是葡萄糖与乳糖，比例为1：10，指示剂为酚红。内还含有蛋白质4种衍生物：牛肉浸膏、酵母浸膏、蛋白胨和胨，硫代硫酸钠，铁盐等，无抑制物。KIA第32页,共42页，星期六，2024年，5月连续培养数小时后，在细菌和氧的作用下，培养基斜面部分所含氨基酸发生降解，释放胺类，产即中和斜面部分酸，经18～24小时后，整个斜面转变为碱性，又复原以红色。原理：如某菌只分解葡萄糖，不能分解乳糖，它分解葡萄糖产少量酸，在最初培育的8～12小时内，这少量的酸也足以使深层和斜面酚红指示剂变黄。第33页,共42页，星期六，2024年，5月如某菌既分解葡萄糖，又分解乳糖，那在KIA上产生大量酸（因乳糖含量多），超过斜面上形成的碱，成长整管培养基呈黄色。培养基深层的氨基酸降解作用不足以中和细菌分解葡萄糖所产生的少量酸，故深层仍呈黄色。第34页,共42页，星期六，2024年，5月培养基中的硫代硫酸钠可供给细菌产生H2S所需要的硫，铁盐-硫酸亚铁和枸橼酸铵铁分别与H2S起反应，产生不溶性的黑色FeS沉淀。由于细菌产生H2S需要在酸性环境中，所以KIA只限于琼脂深层变黑。第35页,共42页，星期六，2024年，5月结果：碱性（K），酸性（A）K/K：不发酵碳水化合物，为不发酵菌特征。K/A：葡萄糖发酵，乳糖不发酵，如志贺菌。K/A（黑色）：葡萄糖发酵，乳糖不发酵并产生硫化氢，如沙门菌。A/A：葡萄糖和乳糖发酵，如大肠埃希菌和克雷伯菌属。第36页,共42页，星期六，2024年，5月二．动力靛基质尿素试验（MIU）成分：MIU主要含尿素的半固体培养基，指示剂为酚红，内还有蛋白胨，蛋白胨中含有色氨酸。MIU第37页,共42页，星期六，2024年，5月原理：当细菌在内生长，通过半固体培养基可观察其动力，另如果细菌能产生色氨酸酶，它可水解色氨酸形成靛基质，当加入对-二甲氨基苯甲醛（靛基质试剂）时可形成玫瑰色吲哚，玫瑰色吲哚为红色。如该菌又能产生尿素酶利用培养基中的尿素产碱，加酚红指示剂后显桃红色。因此MIU可以观察细菌动力、靛基质的产生和细菌分解尿素的活性。有动力无动力第38页,共42页，星期六，2024年，5月A管：MIU＋－－B管：MIU＋＋＋第39页,共42页，星期六，2024年，5月明胶水解实验某些细菌能分泌明胶酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则平板培养基中的明胶被分解成小分子的物质，在平板上加上蛋白凝固剂后，明胶被分解部分的培养基呈现透明的状态，可以使菌落周围出现透明圈。第40页,共42页，星期六，2024年，5月淀粉水解实验有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色,在平板上加上碘液后，有淀粉的部分培养基遇淀粉变为兰色,淀粉被分解部分的培养基呈现透明的状态，可以使菌落周围出现透明圈。第41页,共42页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第42页,共42页，星期六，2024年，5月关于细菌的生化试验第2页,共42页，星期六，2024年，5月第3页,共42页，星期六，2024年，5月细菌的基本鉴定技术生化反应鉴定：通过观察细菌利用酶和降解糖类、醇类、脂类、蛋白质和氨基酸的能力可以了解其生化活性，从而识别和鉴定细菌。免疫学鉴定（血清学鉴定）编码鉴定第4页,共42页，星期六，20