一种基于定量PCR的CRISPR_Cas9基因编辑作物快速检测方法的研究.docx

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2024-11-05 发布于北京
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生物技术进展

生物技术进展2023年第13卷第6期907~912CurrentBiotechnologyISSN2095?2341

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一种基于定量PCR的CRISPR/Cas9基因编辑作物快速检测方法的研究

张笑天1，2，王智2，朱鹏宇2，魏霜3，付伟1，2，黄春蒙2，李志红1，王慧煜2，

焦悦4*

1.中国农业大学植物保护学院，北京100193；2.中国检验检疫科学研究院，北京100176；

3.广州海关技术中心，广州510623；

4.农业农村部科技发展中心，北京100122

摘要：基因编辑技术自诞生以来，在作物育种、基因功能分析中得到了广泛的应用，其中CRISPR/Cas9系统是目前使用最多的基因编辑技术。基于荧光定量PCR技术，针对编辑位点设计特异性探针，结合基因组快速提取方法和成熟的水稻内参基因PLD引物，对自行研发的CRISPR/Cas9系统编辑水稻的Os11N3基因进行检测，并通过合成质粒模拟不同突变情况对该方法的特异性进行了验证。研究所建立的体系可在节约时间和成本的同时获取满足qPCR检测所需的基因组，能够区分1bp基因编辑突变体与野生型，具有良好的特异性和灵敏度。检测方法可为作物育种筛选节省时间和成本，为基因编辑产品检测监管提供技术支持。

关键词：基因编辑水稻；qPCR；分子检测；CRISPR/Cas9DOI：10.19586/j.2095?2341.2023.0080

中图分类号：Q75，S511文献标志码：A

ARapidDetectionMethodBasedonqPCRforCRISPR/Cas9EditedCrops

ZHANGXiaotian1，2，WANGZhi2，ZHUPengyu2，WEIShuang3，FUWei1，2，HUANGChunmeng2，LIZhihong1，WANGHuiyu2，JIAOYue4*

1.CollegeofPlantProtection，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China；2.ChineseAcademyofInspectionandQuarantine，Beijing100176，China；

3.GuangzhouCustomsTechnologyCenter，Guangzhou510623，China；

4.DevelopmentCenterforScienceandTechnology，MinistryofAgricultureandRuralAffairs，Beijing100176，China

Abstract：Geneeditingtechnologyhasbeenwidelyusedincropbreedingandgenefunctionanalysissinceitsbirth.CRISPR/Cas9systemhasbeenthemostusedgeneeditingtechnologyatpresent.FordetectingtheOs11N3geneofriceeditedbytheself-developedCRISPR/Cas9system，thisstudydesignedspecificTaqmanprobesforeditingsites，combinedwithrapidgenomeex?tractiontechnologyandmaturericePLDgeneprimerprobes.Thespecificityofthemethodwasverifiedbysimulatingdifferentmutationswithsyntheticplasmids.ThesystemestablishedinthisstudycouldsavetimeandcostwhileobtainingthegenomethatmettherequirementsofqPCRdetection.Itcoulddistinguishatleast1