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免疫组化操作步骤

一免疫组化〈LP法)操作步骤，

1切片常规脱蜡至水。如需抗诛修复，可在此步后进行

2，缓冲液洗3min/2次。

3，为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性霄景染色，将切片放在”Hydrogen

PeroxideBlock中贱育10-15分钟。

4，缓补液洗5min/2次。

5滴加UltraYBlock，在室温下孵育5分钟以封闭非特异性的背景栾色。

〈注:风育不要超过10分钟,否则会导致特异性当色降低。如果一抗的稀释液中含有有5

一10%赴常羊血清，这一步可以省略。》

6，组州液洗5min/2次。

7，滴加一抗工作液37有旷育1一2小时。(有具体旷育时间和温度出试验郑最终决定)

8，组痢液洗5min/2次。

9滴加PrimaryantibodyEnhancer(增强了于)，在室温下孵育20分钟。

10.缓冲液洗5min/2次。

11.滴加HRPPolymert卫慰一抗)，在室温下凡育30分钟。

(注:HRPPolymer对光生感，应避免不必要的光暴碾并储存在不透明的小瓶中。)

12.缓冲液洗5min/2次。

13.向lmlDABPlusSubstrate(或AECPlusSubstrate)中酒如1-2滴DABPlus

Chromogcn《或AECPlusChromogcn)，混匀后滴加到切片上，孵育3一15分钟。

(具体时间由染色深浅状定。》

14.自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。

二.免疫组化〈三步法)操作步骤:

(1)、硬蜡切片脱螨至水。

(2)、3%H202室温旺育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。

(3)、莫饮水冲洗，PBS浸泡5分钟x2《如需抗愿修复，可在此步后进行)。

(4》、5-10%正常山羊血清〈PBS稀释)封阿，室温贱育10分钟，倾去血清，

勿洗。滴加一抗工作液，37铸育1-2小时或4C过夜。

(5)、PBS冲洗，5分钟x3次。

(6)、滴加适量生物素标记二抗上作波，37C同育10-30分钟。

(7)、PBS冲洗，5分钟x3次。

58)、滴加适量的辣根酶或碱性伙酸酶标记的链得卵白订工作液，37C同谋

10-30。分钟。

(9)、PBS部洗，5分钟x3次。

(10)、最色剂显色3-15分钟(DAB或NBT/BCIP)

(11)、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。

三，冰并切片免疫组化染包步骤;

冰冻切片4-gum，室温放浓30分钟后,入4它丙柄固定10分钟，PBS洗,5分钟x3，

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三、免疫组化方法中关键环节及其原理解述

《一)酶免疫组化的关洗环节

EN

使抗原抗笨结合物吻于获得良好的染色结果，国图定的标不易于保存。

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切片时刀片要干净和锋利。否则，容易裂片和腊片等。

3、脱嵌和水化:这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可

以先60度20min，然后立即