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生命科学学院

本科生能力提高项目（科研训练）基金

子课题概要

申请类别：指南项目□√开放项目□

课题名称：植物细胞内参与K+吸收过程的基因克隆?

教师姓名：祁智研究方向：植物分子生物学

合作指导教师：赵永秀

拟接收本科生年级和人数：二年级和二年级以上学生，5-6人

研究项目介绍

背景知识简介

（或训练内容）

分子生物学的一个基本课题是克隆负责特定生理功能的基因和确定已知基因的生理功能，其所涉及的基本理念和基本手段在动物和植物细胞之间完全相同。参与本项目的每一个学生将接受10到30课时的理论培训，同时将从最基本的步骤开始，自主完成基因克隆的基本步骤。本项目比较适合计划报考基础生命科学领域研究生的同学。

生物体的基本生理活动受细胞核内染色体上的基因控制。克隆负责特定生理功能的基因的基本方法是建立基因缺失型突变体库。通过对比正常生物体和基因缺失型突变体在特定条件下的生理行为，人们就可以确定每一个基因负责的生理功能。

本项目计划利用模式植物拟南芥为实验材料，寻找植物负责吸收钾离子的新基因。第一步，我们将利用农杆菌将外源DNA片段插入植物染色体内的能力，在植物基因组内产生一系列随机突变，最终产生一个突变体库，其中的每一棵植物都有一个或是两个基因被破坏。

第二步，我们将设计两个和植物吸收钾离子相关的生理条件，对突变体库中种子进行筛选，对于表现异常的植物，将通过基本遗传学的方法确定是单基因还是多基因突变，是显性还是隐性突变。我们将主要研究单基因隐性突变体。

第三步，我们将利用特殊的基因片段扩曾的方法确定突变基因的具体序列，然后通过已有的生物信息学软件对该基因的基本情况进行分析预测，最后将基因克隆到可以在细菌中长期保存的质粒上。

第四步，我们将利用发光蛋白和荧光显微镜，在活体细胞内跟踪这个基因所编码的蛋白在细胞内的分布情况。

第五步，项目成员将对实验数据进行整理，书写研究报告。

现有研究基础

指导教师从事植物矿质离子相关的分子生物学和细胞生物学研究十多年，参与了植物第一个钾离子基因克隆的过程，并且独立克隆了负责植物从钾离子贫瘠的环境中吸收钾离子的基因，AtHAK5；独立克隆了植物细胞中被氨基酸调控的吸收钙离子的基因，AtGLR3.3。对这个领域所涉及的基本概念和基本技术有一定的积累。

在实验条件方面，指导教师所在的实验实还在逐步建设阶段。计划在2010年春季具有完成项目第一和第二步所需的设备，在2010年底实验室所有分子生物学和专门动态检测离子的仪器到位，可以支持项目的进一步研究。

研究摘要

本项目以模式植物拟南芥为材料，以克隆负责植物吸收钾离子的基因为目标，旨在使参与项目的学生熟悉功能基因克隆的全过程，同时熟悉基础生命科学研究的基本生理和分子生物学手段。为将来攻读相关领域的研究生打下良好基础。

进度计划

第一年：建立拟南芥突变体库，对突变体库中种子进行筛选，对于表现异常的植物进行基本遗传学分析。

第二年：对突变基因进行克隆和序列分析；分析基因表达的组织特异性和该基因所编码的蛋白在细胞内的具体功能位点。

第三年，项目成员对实验数据进行整理，补充实验，书写研究报考和研究论文，投稿，论文的进一步修改直至定稿。

预期成果形式

在这个大课题的框架下，参与项目的每一位学生，根据自己的时间和兴趣，既可以独立负责一个更为专门的方向，从而发表一篇第一作者的SCI论文，或是作为一个专门方向的辅助工作者，发表一篇第二或是第三作者的SCI论文。

项目来源说明

注：本表供拟承担指南项目或开放项目的指导教师填写，并向学生公布。