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养驴场马流产沙门氏菌病防控技术规范

1范围

本文件规定了养驴场马流产沙门氏菌病防控技术的临床诊断、实验室诊断、预防、治疗和档案管理。本文件适用于养驴场由马流产沙门氏菌导致母驴流产的防控。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验

GB13078饲料卫生标准

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

NY/T570马流产沙门氏菌病诊断技术

SN/T1382马流产沙门氏菌凝集试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

养驴场马流产沙门氏菌病equineabortussalmonellosisofdonkeyfarms

由马流产沙门氏菌引起的以母驴流产为主要特征的驴传染病，该病多见于规模化驴场。

4试剂和材料

见附录A。

5器械和设备

见附录B。

6流行病学

6.1传染源

带有马流产沙门氏菌的驴是主要的传染源。

6.2传播途径

主要通过消化道，也可以通过交配感染。隐性带菌动物可由内源感染而发病。

6.3易感动物

主要感染马属动物，包括马、驴、骡。

6.4发病特点

6.4.1一年四季均可发生，主要发生于春秋季节。一般为散发，有时呈地方性流行。

6.4.2通常在妊娠后期发生流产，9~11月龄多见。

7临床诊断

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7.1临床症状

7.1.1该病极易感染初产母驴和初生驴驹，多数母驴在流产发生前无明显的临床症状。驴驹感染后易发生关节炎。

7.1.2少数患病孕驴在发生流产前，会出现拒绝饮食，精神不安，出汗，轻微腹痛，乳房有轻度肿胀，排尿频繁，阴道有时会流出血样液体，继而发生流产。

7.1.3流产后有的会引起子宫炎症，体温升高。阴道还会流出红色至灰白色粘性液体。

7.1.4若出现继发感染，体温可高达40℃,并出现严重的全身症状，阴道流出污红色腥臭味液体。

7.2病理变化

胎衣不下，流产胎儿、胎膜水肿、增厚，表面附有糠麸样物质，部分胎膜呈污红色坏死。胎儿皮肤、黏膜、浆膜及实质脏器呈现黄染和出血性败血症变化。个别脏器发生坏死，肝脏出血，脾脏边缘有出血点。羊水浑浊，呈淡黄色或紫红色。

7.3判定

疑似病例可采用病原分离、PCR检测、凝集实验等方法确诊。

8细菌分离鉴定

8.1样品采集

应按NY/T541的规定执行。主要包括血液、肛拭子、胎衣、羊水和流产胎儿的肝脏、脾脏等。

8.2细菌分离培养

8.2.1将采集的样本取少量接种于四硫磺酸钠煌绿增菌液中，于37℃培养18h～24h。增菌液呈现均匀浑浊，管底有粘稠沉淀物。将培养物划线接种于SS琼脂上，出现正圆形、无色或淡桔红色、半透明中等菌落，产H2S的菌株使菌落中心带黑色。

8.2.2挑取疑似菌落接种普通斜面进行纯培养，并接种三糖铁琼脂和尿素琼脂，于37℃孵育18h～24h。三糖铁上出现斜面黄色或红色，底层黄色，产气，不分解尿素，产H2S的菌株使菌落底层带黑色。

8.3显微镜检

将分离的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。显微镜下（100×)可见中等大小、散在、着色良好的杆菌，革兰氏阴性。

8.4生化特性鉴定

挑取斜面上的纯培养物，分别接种糖发酵管、蛋白胨水、磷酸盐葡萄糖蛋白胨水以及枸橼酸盐琼脂，于37℃温箱中孵育18h～24h。发酵葡萄糖产酸、不发酵乳糖，吲哚实验阴性，MR实验阳性，VP实验阴性，利用枸橼酸盐。

8.5PCR检测

8.5.1DNA抽提

将采集组织样品加入5体积的无菌PBS研磨匀浆，5000×g离心15min，收集100μL上清液提取制备细菌模版DNA，测其浓度后冻存备用。

8.5.2PCR检测

在0.2mLPCR薄壁管中配置PCR体系：12.5μL2×TaqPCRMasterMix、上下游引物（20μmol/L）

各1μL，待测样品DNA模版（基因组DNA20~50ng/μL）2μL，ddH2O8.5μL，共25μL体系。设置空

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白对照（以水为模板）。反应条件：95℃预变性5min；95℃30s、60℃30s、72℃20s，30个循环；72℃延伸10min，4℃保存。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行分析，设立马流产沙门氏菌阳性片段和