DBXM024-2021牛呼吸道合胞体病诊断技术.docVIP

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FORMTEXT吉林省地方标准

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FORMTEXT牛呼吸道合胞体病诊断技术

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FORMTEXT（本稿完成日期：2021-11-20）

FORMTEXT-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

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FORMTEXT吉林省市场监督管理厅???发布

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前??言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由吉林省畜牧管理局提出并归口。

本文件起草单位：吉林省农业科学院、吉林省动物疫病预防控制中心、吉林省畜牧兽医研究院、吉林省畜牧兽医学会。

本文件主要起草人：肖丹、邵洪泽、曲磊、王楠、任锐、马晓媛、胡泽宇、曹东阳、胡诗悦、王建超、王欣宇、安东、赵楚琦。

牛呼吸道合胞体病诊断技术

范围

本文件规定了牛呼吸道合胞体病的临床诊断、样品采集与处理、病毒分离、反转录聚合酶链式反应、荧光定量RT-PCR的技术要求。

本文件适用于牛呼吸道合胞体病的诊断。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过中文的规范性引用而构成本文件的必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

缩略语

下列缩略语适用于本文件

BRSV：牛呼吸道合胞体病毒（bovinerespiratorysyncytialvirus）

CPE：致细胞病变（cytopathiceffect）

PBS：磷酸盐缓冲液（phosphatebufferedSaline）

MDBK：牛肾传代细胞（madin-darbybovinekidney）

RNA：核糖核酸(ribonucleicacid)

RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reversetranscriptionpolymerasechainreaction）

Real-timeRT-PCR：荧光定量反转录聚合酶链式反应（real-timequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction）

临床诊断

流行病学特点

牛出血性败血病主要感染牛，其中以犊牛最易感。主要传染源是病牛和带毒牛，可通过直接接触和飞沫传播经呼吸道侵入易感牛体内。该病一年四季均可发生，以秋、冬两季发病较多，恶劣养殖环境、长途运输和过早断奶等应激会促进该病的发生，若继发细菌感染则死亡率会大幅提高。

临床症状

青年牛和成年牛一般呈隐性感染过程，无明显临床症状，或有少量浆液性鼻液汁和轻微咳嗽，出现轻微沉郁，偶有发热、产奶量下降、咳嗽、流鼻液、流泪以及流涎等症状，经治疗后很快消失。6月龄内的牛感染常引发急性呼吸道疾病，表现为沉郁和厌食，病牛体温升高，伴有呼吸困难或干咳、结膜炎、鼻眼有分泌物等症状，病程严重时出现气肿、胸膜肺炎和皮下积液。

病理变化

牛呼吸道合胞体的病理变化与BRSV毒株毒力强弱，应激、合并或继发感染有关。病毒感染可引起间质性肺气肿，气管和支气管粘膜充血，气管内充满粘稠的粘液，气管淋巴结、支气管淋巴结、腔淋巴结的肿大、水肿。主要组织学变化是单核细胞浸润、中性粒细胞浸润导致肺泡壁增厚，肺泡腔内可见多核巨细胞，支气管内有脱落的上皮细胞和中性粒细胞，并且伴有淋巴组织增生。重症可见支气管周围单核细胞聚集，支气管淋巴结的实质和髓质水肿。

临床诊断结果判定

牛出现上述临床症状和病理变化，结合流行病学特点，可判定为疑似BRSV感染，需采集患病牛的鼻腔分泌物或病死牛的肺部组织等进行实验室诊断。

样品采集与处理

仪器设备

高压蒸汽灭菌器。

组织匀浆机或研磨皿。

－20℃

高速冷冻离心机（最高离心速度不低于1200