分子发光分析法课件.pptVIP

第七章分子发光分析法;第一次记录荧光现象的是16世纪西班牙的内科医生和植物学家N.Monardes，1575年他提到在含有一种称为“LignumNephriticum”的木头切片的水溶液中，呈现了极为可爱的天蓝色。

直到1852年，Stokes在考察奎宁和叶绿素的荧光时，用分光光度计观察到其荧光的波长比入射光的波长稍微长些，才判断这种现象是这些物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，而不是由光的漫射作用所引起的，从而导入了荧光是光发射的概念，他还由发荧光的矿石“萤石”推演而提出“荧光”这一术语。

1867年，Goppelsroder进行了历史上首次的荧光分析工作，应用铝—桑色素配合物的荧光进行铝的测定。

19世纪以前，荧光的观察是靠肉眼进行的，直到1928年，才由Jette和West提出了第一台荧光计。;

某些物质的分子吸收一定能量后，电子从基态跃迁到激发态，以光辐射的形式从激发态回到基态，这种现象称为分子发光，在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析法

;根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类：

光致发光：以光能来激发而发光

电致发光：以电能来激发而发光—荧光灯

生物发光：以生物体释放的能量激发而发光

化学发光：以化学反应能激发而发光;一、荧光与磷光的产生过程

由分子结构理论，主要讨论荧光及磷光的产生机理。

1.分子能级与跃迁

分子能级比原子能级复杂；

在每个电子能级上，都存在振动、转动能级；

基态(S0)→激发态(S1、S2、激发态振动能级)：吸收特定频率的辐射；量子化；跃迁一次到位；

激发态→基态：多种途径和方式(见能级图)；速度最快、激发态寿命最短的途径占优势；

第一、第二、…电子激发单重态S1、S2…；

第一、第二、…电子激发三重态T1、T2…；;2.电子激发态的多重度;3.激发态→基态的能量传递途径;S2;非辐射能量传递过程;辐射能量传递过程;二、激发光谱与荧光(磷光)光谱;2.荧光光谱(或磷光光谱);;3.激发光谱与发射光谱的关系;镜像规则的解释;200;三、荧光的产生与分子结构的关系;2.化合物的结构与荧光;不产生荧光;;四、影响荧光强度的因素;pH≈1有荧光;4.内滤光作用和自吸现??;5.溶液荧光的猝灭;一、仪器结构流程;1、光源;2、单色器;3、样品池;4、检测器

把光信号转化成电信号,放大,直接转成荧光强度

荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管

荧光分析比吸收光度法具有高得多的灵敏度，是因为荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度可大大提高荧光强度

5、读出装置

记录仪记录或打印机打印出结果，扫描激发光谱和发射光谱;仪

器

光

路

图;同步扫描技术;可获得三维光谱图的仪器;激发光谱和荧光、磷光光谱;I;从图中看出

?磷＞?荧＞?激;A.激发光谱;?ex=290nm(MAX);2.三维荧光光谱;IF∝f(λex、λem);蒽的三维等高线光谱图;蒽的三维等荧光强度光谱;VB1和VB2的三维荧光光谱;RLS;磷光检测;二、荧光分析方法与应用;2、方法;3、定量依据与方法;（2）定量方法;4、荧光分析法的应用;;(2)生物与有机化合物的分析;1、低温磷光分析法;低温磷光分析常用试剂;2、室温磷光分析;3、室温磷光分析应用;;一、基本原理;;;;2.化学发光效率;3.化学发光强度与化学发光分析的依据;4.化学发光反应的类型;O3→O2+O（1000?C石英管中进行）

NO+O→NO2*

NO2*→NO2+h?

发射光谱范围：400～1400nm；灵敏度1ng/cm-3；

氧原子与CO的发光反应：

CO+O→CO2*

CO2*→CO2+h?

发射光谱范围：300～500nm；灵敏度1ng/cm-3；

;c.乙烯与O3的发光反应;（2）火焰中的化学发光反应;b.硫化物;（3）液相中的化学发光反应;5.化学与生物发光分析的应用;草酸二酯(能量提供体)+高浓度双氧水+稠环芳烃(能量接受体)+金属离子+溶剂组成的反应体系，可发出很强的可见光，发光效率高，使用不同的稠环芳烃，发射出不同颜色的光(冷光源)。;生物发光分析应用1;生物发光分析应用2;二、特点characteristics;;;三、装置与技术

instrumentandtechnology;分立取样式液相化发光仪