微生物实验思考题参考答案及知识要点.docx

二.细菌的简洁染色与革兰氏染色

1.革兰氏染色中那一步是关键为什么？你是如何操作的？

革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。假设脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当限制速度，脱色时间一般为20—30s）。

2.固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？

自然死亡的菌体本身已经局部自溶，构造已经变更。固定杀死细菌时细菌构造是保持死亡时的状态的。

3.不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌与阴性菌？

能。在酒精脱色后，不被酒精脱色而保存紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最终一步用番红染液复染，是为了让结果更清晰。

4.涂片为什么要固定，固定适应留意什么问题？

a杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b增加其对染料的亲与力。

固定时应留意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。

三.霉菌、放线菌的形态视察

1.镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？

一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。

2.显微镜下细菌放线菌酵母菌与霉菌的主要区分是什么？

放线菌与细菌须要在油镜下才能视察清晰，而霉菌与酵母菌在低倍镜下即可看到。

细菌：为细而短的单细胞微生物（个体微小），主要形态有：球、杆、螺旋状等。（局部杆菌还可形成芽孢）

放线菌：存在分枝丝状体与菌丝体，革兰氏阳性菌，有孢子丝与孢子（球形、椭圆形、杆状、柱状）。

酵母菌：单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。菌体比细菌大几倍到几十倍，局部处于出芽繁殖过程中菌体还可视察到芽体，大多数菌体上还有芽痕。

霉菌：菌丝与孢子的宽度通常比细菌与放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍到几十倍，在低倍镜下即可看到，并还可看到孢子囊梗、囊轴、孢子囊、包囊孢子等。

四.玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌

1.高压蒸汽灭菌开场时为什么要将锅内排尽？灭菌后为什么要待压力降低到“0”时，才能翻开

因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱与蒸汽的温度。假设压力未降到0时，翻开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培育基由于内外压力不平衡（压力突然下降而发生复沸腾）而冲出烧瓶口或试管口，造成培育基等液体沾湿棉塞或溢出等事故。

2.设计试验方案，比拟干热灭菌与湿热灭菌的效果。

以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件与等量原则。

试验材料

试管镊子酒精灯嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC7053菌片纸片（与菌片同大小同材料）溴甲酚紫蛋白冻水培育基（已灭菌）等试验材料（材料有余）。

比照组

取9支干净试管，分为A1B1C1三组（每3支一组），将A1组中放入菌片，B1组中放入纸片，C1组中什么也不加；不经灭菌，干脆参加溴甲酚紫蛋白冻水培育基（等量）。

恒为培育

将上述全部试管按分组在56℃恒温条件下培育

3.为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高时间长？

在湿热条件下，有水蒸汽的作用：

a高温水蒸汽导热比干空气要快；

b高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程；

c高温水蒸汽能穿透细菌的细胞膜，干脆进入细胞内破坏细胞；

c高温水蒸汽能水解一局部细胞构造，加速导热。

（湿热中细菌菌体汲取水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的穿透力比干热大；湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能快速进步被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。

五.培育基的配置

1.配制牛肉膏蛋白胨培育基，有哪些操作步骤？那几步易出错，如何防止？

称取药品—加热溶化—分装—加棉塞—包扎—灭菌—搁置斜面

易出错的步骤有：

a称取药品称取时钥匙专用，瓶盖不要错盖，易吸水的药品要快速称取；

b加热溶化参加药品后要用玻璃棒不停搅拌，以免糊底（在琼脂熔化过程中，应限制火力，以免培育基因沸腾而溢出容器，同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。）；

c分装分装时培育基不能粘在三角瓶（或试管）口，以免接种时染菌；

d搁置斜面斜面长度约试管长度一半为宜。

2.配制培育基的一般原则是什么？

a目的明确b养分协调c理化相宜d经济节约

六.平板菌落计数法

1.平板菌落计数法的原理是什么它适用于那些微生物的计数？

平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取确定量