谷胱甘肽GSH_教程.pptVIP

谷胱甘肽（glutathione）是一种由3个氨基酸组成的短肽，存在于几乎身体的每一个细胞中，但是谷胱甘肽必须在有产生的细胞及其前体（Vc和α-硫辛酸）的条件下才可以有效地在人体内工作，谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，在细胞中，谷胱甘肽主要发挥抗氧化剂的作用。

谷胱甘肽由谷氨酸，半胱氨酸和甘氨酸组成，分子中半胱氨酸的-SH是主要的功能性基团。

谷胱甘肽广泛分布于自然界的生物体中(Wierzbicka等，1989)，主要存在于酵母、动物肝脏、肌肉、血液中，许多植物，如蔬菜、豆类、谷物、薯类、菇类及细菌中也含有一定量的谷胱甘肽。

;谷胱甘肽的理化性质;GSH的生理功能;GSH在疾病上的应用;GSH在食品上的应用;GSH在美容上的应用;市场前景;生产成本和研究进展

目前，国内市场上还原型谷光甘肽的原料药价格在4000元/kg以上，而谷胱甘肽的生产成本约1500元/kg左右

谷胱甘肽的生产方法主要有化学合成法、酶转化法和发酵法。目前，化学合成法和提取法已经工业化，酶转化法正在进行广泛研究，尚未用作GSH的工业化生产。微生物发酵法用于谷胱甘肽的生产是当前世界上主要的生产方法，国外谷胱甘肽的主要产地在日本，国内谷胱甘肽的研究起步较晚，现在主要还是在一些研究院校内，处于研究阶段，没有形成一定的生产规模。

;谷胱甘肽的生产工艺;酵母发酵法生产谷胱甘肽;菌种的选育：酵母菌

选育抗乙硫氨酸突变株：γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶是催化谷胱甘肽合成的主要酶。他受谷胱甘肽的反馈抑制，乙硫氨酸是谷胱甘肽的结构类似物，低浓度时促进谷胱甘肽的合成，高浓度时要抑制细菌生长和谷胱甘肽的合成。

选育抗锌离子的突变株：zn是多种脱氢酶，脱羧酶和肽酶的辅因子，在低浓度时促进细菌生长，当达到一定浓度时能使谷胱甘肽还原酶活性中心变构失活，抑制胞内谷胱甘肽的继续合成。

培养基：

碳源：葡萄糖蔗糖糖蜜葡萄糖是最佳碳源。

氮源：牛肉膏蛋白胨酵母膏牛肉膏是最佳氮源。单一氮源对细胞生长和谷胱甘肽的产量明显优于有机氮源，混合无机氮源对谷胱甘肽的产量有明显的??高。

无机盐离子：微生物在缺乏Mg时，不能合成谷胱甘肽；Mg过量会抑制谷胱甘肽的合成。在10mmol/L时，产量达到最大。

;发酵条件的影响：

温度：较高的温度有利于细胞的生长，但是低温更有利于谷胱甘肽的合成。

因此前期控制37培养菌体，后期降低温度增加谷胱甘肽的合成。

PH：细胞生长最适PH和产物合成最适PH并不一致。一般细胞生长最适PH为7.2，产物合成最适PH为6.7。

溶氧：通气量控制在5L/min时，搅拌转速达到300r/min即可满足细胞生长和谷胱甘肽合成对溶解氧的需求。

前体物质：1）谷氨酸半胱氨酸甘氨酸混合物。开始时加入会对细胞生长和谷胱甘肽的合成油抑制作用，在发酵12小时以后（进入对数生长后期）添加会提高谷胱甘肽的产量。

2）ATP谷胱甘肽的生物合成受两步酶反应影响1）L-谷氨酸和L-半胱氨酸在γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶作用下合成γ-谷氨酰半胱氨酸；2）γ-谷氨酰半胱氨酸和甘氨酸在谷胱甘肽合成酶作用下合成GSH.两步酶反应均需要ATP参与,若ATP不足则酶反应会受到极大抑制。0h加入ATP对菌体生长和GSH合成更为有利。

;发酵过程的调控

葡萄糖的流加策略：只有在葡萄糖几乎耗尽、生长停止时,细胞内才开始大量合成GSH;且由于GSH是胞内产物,所以在提高生产菌株胞内合成GSH能力的同时,还需要在发酵过程中设法提高细胞数,以提高GSH的总产量。所以必须加大底物(如葡萄糖)的质量浓度。但过高的葡萄糖浓度会产生Crabtree效应,抑制细胞的生长并且目标产物得率会大大下降,因此一般采用后期限量流加葡萄糖的方法,以消除底物抑制,达到高密度细胞培养、延长GSH的生产时间的目的。

前体物质的添加：在前体氨基酸中,半胱氨酸为GSH合成的关键氨基酸,它的存在能明显提高细胞内GSH含量及GSH的比生产速率,但阻碍细胞量的增加。在发酵过程中半胱氨酸的补加策略应以尽量减少对生长的抑制为原则。

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