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（仅供参考）化学发光常见问题集锦

BeckmanCoulterACCESS系列全自动微粒子化学发光

免疫分析系统

常见问题及答疑

目录

第一部分：化学发光基础知识第1--17问第二部分：仪器应用部

分第18--76问第三部分：项目应用部分第77—109问

第一部分：化学发光基础知识

1什么是化学发光，与放免、酶免比较有何不同？

化学发光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）

是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新

型标记免疫测定技术。

化学发光免疫分析比放射免疫，酶联免疫具有更高灵敏度，具备

操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试

剂，试剂保存期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，

成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。

（1）与放免（RIA）产品比较

与放射免疫试剂（RIA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染

以及对操作人员的伤害，大大缩短了反应时间，同时兼具高灵敏度的

优势。

（2）与酶免（ELISA）产品比较

灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作

方法与较短的反应时间。

2什么是标记免疫技术，它的三大要素是什么？

将Ag或Ab用标记物(如荧光素、酶、放射性同位素、化学发光物

质等)进行标记，在与标本中的相应Ab或Ag反应后，可以不必测定

Ag-Ab复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作

用，进一步提高了免疫技术的敏感性。

三要素：通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（labeling）

的物质,常标记在抗体上通常会有一个分离（separation）的过程在最

后读取信号前

需要去仔细关注一下分析的模式（format）

3标记免疫技术主要有哪几种？

主要经历了四种标记免疫技术的发展：荧光素(Fluorophores)–

FIA

放射性同位素(Radioisotopes)–RIA

酶(Enzymes)–EIA

化学发光物质-CLIA

4ACCESS化学发光原理？

分析方法及过程

ACCESS系统采用磁性微粒作为固相载体，以AMPPD作为发光

剂，固相载体的应用扩大了测定的范围。以竞争法、夹心法等免疫测

定方法为基础。试剂包装采用特殊的设计，每个试剂包有5个小室分

别把不同的试剂分开，减少了交叉污染，保证了检测质量。

⑴、抗原抗体结合：将包被单克隆抗体的顺磁性微粒和待测标本

加入反应管中，标本中的抗原与微粒子表面的抗体结合，再加入碱性

磷酸酶标记的抗体，经温育后形成固相包被抗体-抗原-酶标记抗体复

合物。

⑵、洗涤、分离：在电磁场中进行3次洗涤，很快将未结合的多

余抗原和酶标记抗体洗去。

⑶、加入底物AMPPD发光剂：AMPPD被结合在磁性粒子表面

的碱性磷酸酶的催化下迅速去磷酸基因，生成不稳定的中介体AMPD。

AMPD很快分解，从高能激发态回到低能量的稳定态，同时发射出光

子，这种化学发光持续而稳定，可达数小时之久。通过光量子阅读系

统记录发光强度，并从标准曲线上计算出待测抗原的浓度。

5什么是钩状效应（hookeffect），如何判断及解决？

免疫测定的实质是抗原抗体反应，抗原抗体反应是按一定的分子

比例结合，当二者比例适中时，形成的免疫反应最强烈，形成复合物

或检测的信号与所测的抗原或抗体成比例关系，但当抗原或抗体其中

一者过量时，免疫反应将减弱，测定值呈现假性低值。

在化学发光中像二步分析法一般都能避免钩状效应，对于一步夹

心法项目说明书中都提到了产生钩状效应的上限如人绒毛膜促性腺激

素的钩状效应值是100万mIU/ml.在实际工作中如遇到测定值与临床

严重不符的结果要考虑到钩状效应，解决办法是稀释此样本。磁性微

相载体