表达2.3.2.1d分支H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建和评价.pdfVIP

第42卷第12期中国预防兽医学报Vol.42No.12

2020年12月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineDec.2020

doi：10.3969/j.issn.1008-0589.202003016

表达2.3.2.1d分支H5亚型禽流感病毒HA基因重组

鸭瘟病毒的构建和评价

王波，赵玉博，胡玉珍，丁蕾蕾，陈普成，焦晨晨，姜永萍，陈化兰，柳金雄*

（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150069）

摘要：为研究H5亚型禽流感病毒（AIV）HA基因重组鸭瘟病毒（DEV）载体活疫苗，本研究利用DEV疫苗株多

片段体外拯救系统，将我国H5亚型AIV2.3.2.1d分支代表病毒CK/LN/SD007株的血凝素（HA）基因插入DEV基因组

中，构建了重组DEV，对其进行PCR、间接免疫荧光实验、westernblot和传至15代后的遗传稳定性试验。结果显

示，构建了一株表达CK/LN/SD007株HA基因的重组DEV，并且HA基因能够在重组病毒中正确表达并稳定遗传，命

名为rDEVH5-12；将rDEVH5-12和亲本病毒DEV疫苗株接种鸡胚成纤维细胞（CEF）后，收集96h内不同时间点的

并绘制生长曲线。结果显示，rDEVH5-12在CEF中的生长曲线和亲本病毒DEV疫苗株无显

病毒样品，检测TCID50

著差异；rDEVH5-12以105TCID免疫SPF鸭2周后，进行DEV和AIV攻毒保护试验。结果显示，rDEVH5-12一次

50

免疫SPF鸭后2周即能诱导对DEV强毒和AIV（CK/LN/SD007）攻击的完全保护，即免疫组SPF鸭在观察期内无排毒，

无死亡，对照组SPF鸭在观察期内全部排毒，而且死亡；rDEVH5-12以105TCID免疫SPF鸭2次后，每周采集血清

50

进行血凝抑制（HI）抗体效价检测。结果显示，rDEVH5-12首免SPF鸭后2周，多数鸭HI抗体转阳，加强免疫后1

5

周，HI抗体水平达到高峰（HI抗体最高水平为2），随后HI抗体缓慢下降，至加强免疫后第7周，37.5%的鸭HI抗体

仍为阳性。以上结果表明，拯救的表达H5亚型AIVHA基因的重组鸭瘟病毒（rDEVH5-12），可作为防控鸭瘟和水禽

流感的二联活疫苗候选株。本研究为DE和水禽H5亚型AI的防控提供了新思路。

关键词：重组鸭瘟病毒；禽流感；活载体疫苗

中图分类号：S852.65文献标识码：A文章编号：1008-0589（2020）12-1262-06

Constructionandevaluationonrecombinantduckenteritisvirus

expressingHAgeneofH5subtypeavianinfluenzavirusofclade

2.3.2.1d

WANGBo,ZHAOYu-bo,HUYu-zhen,DINGLei-lei,CHENPu-cheng,JIAOChen-chen,

JIANGYong-ping,CHENHua-lan,L