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两起新型布尼亚病毒感染病例的病毒序列分析

目的：分析发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒感染（SFTSV）感染患者

的临床特点、流行病学以及SFTSV基因序列。方法：收集本市2014年4-6月某

医院送检的2例重症发热伴血小板减少（SFTS）患者的血清标本，经核酸荧光

PCR检测阳性确诊。对病毒核酸测序并与GenBank数据比对。结果：两名患者

均有典型的SFTSV感染的临床症状，以发热、腹泻为首发症状，血常规见粒系

及血小板呈进行性降低。从2例患者血清提取的核酸经测序，其基因序列与

GenBank中的SFTSV进行比对，0428株（安庆）的RNA多聚酶、糖蛋白、NS

蛋白的同源性与安徽代表株AHL/China/2011的同源性最高，均达到99%。0507

株（滁州）上述目的基因与江苏株JS2011-013-1的同源性高达99%。结论：SFTSV

在本地区散发存在，基因序列分析结果提示其来源或有差异。

發热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SevereFeverWithThrombocytopenia

SyndromeBunyavirus，SFTSV）是我国2010年新发现的布尼亚病毒科白蛉病毒

属的新病毒。SFTSV感染主要导致发热伴血小板减少综合征（severefeverwith

thrombocytopeniasyndrome，SFTS），引起以发热伴血小板、白细胞减少、严重

的胃肠道症状、浅表淋巴结肿大为主要特征的临床症状，是一种新发传染病，患

者可因多脏器功能衰竭而死亡，病死率较高。河南、湖北、山东、安徽、辽宁、

江苏等省均已出现该病病例[1-2]。新型布尼亚病毒可能为一种由蜱传播的自然疫

源性疾病[3-6]，螨类、鼠类与人群发病之间应有一定的联系[7]，但其在自然界

中的循环传播模式尚不完全清楚。江苏省丘陵地区总面积占全省总面积的15%，

造成江苏SFTSV流行的主要原因可能是因为其地貌特点[8]。2014年4-5月，两

名安徽患者就诊于南京某医院，笔者对其开展了流行病学调查和实验室病原学检

测，采用实时荧光定量RT-PCR及产物测序对布尼亚病毒核酸进行鉴定和分子进

化分析。1资料与方法

1.1流行病学资料2014年4-5月，南京某医院收治两名SFTS患者，均为

男性，年龄分别为62岁和77岁，来自安徽两个城市的不同乡村，职业均为农民，

居住地为丘陵或山区，均无疫区居留史，均无布尼亚病毒阳性患者接触史。蜱虫

叮咬史均不详。其中一名患者发病前两周有采茶经历，另一名患者发病前两周有

种地、割草史。

1.2临床特征2名患者均以发热、腹泻为首发症状。其中一名患者皮肤见瘀

点和瘀斑。

1.3实验室检查血常规见粒系及血小板呈进行性降低，其中WBC下降至

（0.88～1.47）×109/L，PLT最低为40×109/L，血液生物化学检测酶谱较高，包

括转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶等均明显升高，肾功能损害，肌酐升高，低钙

血症。

1.4病原学检查从患者血清提取病毒核酸，使用台塑公司组织RNA全自动

萃取试剂盒提取RNA，按试剂盒说明书操作。实时荧光定量PCR检测：S-F：

GGGTCCCTGAAGGAGTTGTAAA，S-R：TGCCTTCACCAAGACTATCAATGT，

探针：FAM-TTCTGTCTTGCTGGCTCCGCGC（引物序列由江苏省疾控中心提

供）。PCR反应体系用QIAGEN公司的QuantiTect?ProbeRT-PCRKit（Cat.No

20443）试剂盒配制。扩增反应条件：反转录50℃30min；变性95℃5min；

95℃10s，60℃40s；扩增40个循环。标准模式为每个循环60℃40s时收

集荧光。Ct值≤37且有对数增长曲线的为扩增阳性，Ct值37且有对数增长曲线

需重复实验，仍有数增长曲线的为扩增阳性，无对数增长曲线的为扩增阴性。反

应在ABI7500fast荧光定量PCR仪上进行。分析软件为SDSv1.3.2。

1.5序列测定用参考文献[9-10]所述方法對布尼亚病毒基因组依赖RNA