高效液相色谱HPLC操作步骤及问题集锦.pdfVIP

等浓度洗脱：

开机步骤：

1.配有机相，体积≥200ml（空瓶子先装满肥皂水超声10min，再用自来水冲洗10次，蒸馏

水洗4次），砂滤（用有机膜，光面向上，瓶中液体快到瓶口时放气防止倒吸），室温超声

10min。开电源总开关，开计算机，开柱温箱开关，开SPD-15C开关，LC-15C开关。

2.开purge阀，把A管从纯甲醇中取出，靠壁几秒后放入有机相中，purge，绿灯闪后关

purge阀，把废液瓶放地上。

3.打开软件，系统设置：确认添加LC-15C(A)，确认柱温箱为（室温较低35℃，室温较高30℃）

简单设置：LC时间：60min波长：215nm

模式：等浓度洗脱

总流速：0.6ml/min——下载（有机相较少时改流速为0.5ml/min）

点泵开关走基线60min，拔六通阀处塞子和橡胶帽。

（若压力线与基线相差过大，则点击显示设置，修改强度范围，再点击检测器零点，快走

平时调回原来的强度范围）

4.基线走完，不关泵开关，点击单次运行，改文件名和存储位置。

5.纯甲醇洗针三次，每次＞60ul；取待测样品，用0.22um滤膜过滤至2mlEP管中，每针进

样量≥40ul。若管中出现气泡，则拉活塞使气泡变大，用纸捏住针头，推活塞把气泡打入纸

中再进样。

6.进样时，先将针插入六通阀中快而匀速的将活塞推到底，再掰下阀，则仪器自动开始走线。

关机步骤：

方法一：

1.测样结束，点击停止，关泵开关，待压力降为0，开purge阀，将A管从有机相中取出，

靠壁几秒后放回纯甲醇中，purge，绿灯闪后关purge阀。

2.简单设置：总流速：1.0ml/min——下载

点泵开关，洗脱柱子30min

3.在开始洗柱子时，用纯甲醇洗针三次，每次＞60ul；用针吸取纯甲醇洗六通阀，每次≥60ul，

将针插入六通阀，推进活塞后掰下阀，间隔0.5min，把阀掰上，再洗下一针，重复洗三次，

等待洗脱柱子完成。（纯甲醇当天用不完的应丢弃）

4.黑线走平，即表明洗脱柱子结束，关泵开关，收针，塞回塞子和橡胶帽，关软件，关LC-15C

开关，关SPD-15C开关，关柱温箱开关，关机，关电源总开关。

5.洗废液瓶、废液缸。

方法二：

1.测样结束，关泵开关，待压力降为0，开purge阀，将A管从有机相中取出，靠壁几秒后

放回纯甲醇中，purge，绿灯闪后关purge阀。

2.简单设置：总流速：1.0ml/min——下载

3.关软件，关SPD-15C开关

左侧控制面板点击“PUMP”，洗针步骤同上

4.30min洗柱结束后，摁“PUMP”关泵开关，收针，塞回塞子和橡胶帽，关LC-15C开关，

关柱温箱开关，关机，关电源总开关。

5.洗废液瓶、废液缸。

方法三：

1.测样结束，关泵开关：左侧控制面板点击“PUMP”，将阀往上推

2.调流速：Func——连续摁直到出现“systemchange”，1为local，enter确定，摁CE退回

到主界面。再次摁Func使主界面光标移动，数字键盘输入1.0ml/min，enter确定。

3.待压力降为0，开purge阀，将A管从有机相中取出，靠壁几秒后放回纯甲醇中，purge，

绿灯闪后关purge阀。

4.摁PUMP洗脱柱子30分钟，洗针步骤同上。

5.30min洗柱结束后，摁“PUMP”关泵开关，收针，塞回塞子和橡胶帽，关LC-15C开关，

关柱温箱开关，关机，关电源总开关。

6.洗废液瓶、废液缸。

二元梯度洗脱：

开机步骤：

1.配有机相、纯水相，体积≥200ml（空瓶子先装满肥皂水超声10min，再用自来水冲洗10

次，蒸馏水洗4次），砂滤（用水膜/有机膜，光面向上，瓶中液体快到瓶口时放气防止倒吸），

室温超声10min。开电源总开关，开计算机，开柱温箱开关，开SPD-15C开关，LC-15C开关，

LC-15C开关。

2.把A管从纯甲醇中取出，靠壁几秒后放入有机相中，开purge阀，purge，绿灯闪后关purge

阀，把B管从纯甲醇中取出，同样靠壁几秒后放入纯水相中，开purge