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丙型肝炎病毒核酸定量检测性能验证及评价

郭杰;曲沛;李韦杰;周宇;郭晶晶;焦炳欣;王雅杰

【期刊名称】《《传染病信息》》

【年(卷),期】2019(032)005

【总页数】5页(P394-398)

【关键词】HCVRNA;定量检测;实时荧光定量PCR;性能验证

【作者】郭杰;曲沛;李韦杰;周宇;郭晶晶;焦炳欣;王雅杰

【作者单位】100015首都医科大学附属北京地坛医院检验科

【正文语种】中文

【中图分类】R248.4

研究认为HCV是引起90%～95%输血后肝炎的主要病原体[1-4]。据WHO统计，

全球约有2亿人感染HCV，并面临发生肝硬化和/或肝癌的风险[5]。目前，血清

HCVRNA定量检测是实验室诊断丙型肝炎的金标准。及时准确的检测对于HCV

感染者的诊断和预后具有至关重要的意义。其中HCVRNA商品试剂盒分析性能

评价是保证检验结果准确可靠的重要依据之一。根据中华人民共和国卫生行业标准

《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证（WS/T420-2013）》[6]规定，

当我国食品药品监督管理局批准的检验方法或试剂盒进行了重要修改时，应对厂家

制定的各项主要分析性能指标进行验证，依据《美国临床实验室改进修正法规88》

要求，临床实验室可只对下列3项主要分析性能进行验证：正确度、精密度和线

性（测量区间）。北京地坛医院所采用的丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒自批号开始，检出限由250IU/ml改为50IU/ml，为验证在当前实验条

件下该试剂盒检出限是否达到厂家制定的分析指标，我们对该试剂盒的性能进行了

符合补充验证。

1材料与方法

1.1标本收集首都医科大学附属北京地坛医院检验科不同浓度的临床血清（血浆）

标本共30例，标本浓度尽量涵盖线性范围，于-20℃冰箱保存。

1.2仪器与试剂实时荧光定量扩增仪（美国，罗氏cobas®Z480）。丙型肝炎病

毒核酸定量检测试剂盒（上海科华，批号）。HCVRNA标准物质

GBW（E）090140（北京康彻思坦生物有限公司，批号：201801001）。

1.3性能验证指标及验证方法根据中华人民共和国卫生行业标准（WS/T420-

2013）[6]、EP9-A2[7]和中华人民共和国医药行业标准（YY/T1182-2010）[8]

对上海科华丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒进行正确度、精密度、线性、检测限

和抗干扰能力的验证。

1.3.1正确度收集后的标本在1周内使用待验证的丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂

盒集中检测，并将结果与罗氏检测系统的检测结果进行比对。检测结果与靶值之间

绝对偏R≥0.95。

1.3.2精密度批内精密度：选择浓度为1.00E+6IU/ml和1.00E+3IU/ml的临床

血清/血浆样本各1例，在同一批实验中重复测定20次，计算均值（）、标准差

（SD）和变异系数（CV）值，要求CV≤5%。

批间精密度：将浓度为1.00E+6IU/ml和1.00E+3IU/ml的2个标本，在同一批

试验中重复检测4次，连续检测5d，每个水平共收集20个数据；如果出现失控，

则应剔除该数据并重新测定。分别统计2个水平标本检测值的和SD，再计算CV

值，要求CV≤5%。

1.3.3线性范围选择临床浓度为5.00E+7IU/ml的血清/血浆样本，用阴性血清按

10倍梯度稀释至2.50E+2IU/ml，对高值阳性标本和稀释后的标本进行同批次检

测，每个浓度重复检测3次，对测定值和理论值进行线性回归分析，要求满足b

在0.97～1.03范围内，a接近于0，R2≥0.95[9-10]。

1.3.4检测限取北京康彻思坦生物有限公司提供的HCVRNA标准物质GBW（E）

090140（批号201801001），用阴性血清稀释至该试剂盒标定的检测限（50

IU/L）。依据YY/T1182-2010的要求，重复检测该稀释样本25次，检出22次

及以上即为合格。