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第13章纳米技术在基因转导中的应用

随着纳米技术及基因转导技术本身的不断发展，纳米技术将在基因转导过程中发挥更大的作用。

本章通过论述纳米技术在基因转导中的应用来阐述纳米生物学的相关内容。

13.1常用基因转导方法

基因转导是在分子水平上对基因进行遗传操作的一种手段。一个基因经标记、定位并被克隆后，

人们总希望将其导入不同类型的细胞中，以研究外源基因的整合、调控、表达的遗传规律以及分离其

特定的基因产物等。为了研究基因的结构与功能的关系，就必须建立有效的DNA导入细胞的方法。现

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已有多种方法可将DNA直接或间接地导入细胞，这些方法可分为物理方法（如基因枪法、碳化硅纤

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维法、显微注射法等）、化学方法（如高分子复合物介导法、PEG法及磷酸钙法等）、生物方

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法（如脂质体法、农杆菌法、真菌游走孢子介导法及花粉管法等）和生物物理方法（如电击法

[10]和激光介导法等）。这些方法大多可以借助纳米载体协助完成基因转导过程。故本节对它们作了较

详细的介绍。

13.1.1物理方法

1．基因枪法

基因枪转导法又称粒子轰击技术(Particlebombardment)或称生物发射技术(Biolistic

process)、高速微粒子发射技术(High-velocitymicroprojectile)，它是将载有外源DNA片段（基

因）的金或钨等微粒加速后在真空状态下射入受体细胞中的一种遗传物质在物种间或物种内的转导技

术。加速的动力通常是通过高压气体、高压放电或火药爆炸加在粒子上的瞬时冲量等。1987年美国

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康奈尔大学的Sanford等首先发明了火药式基因枪，随后该实验室的Klein等使用该基因枪将携

带有细菌氯霉素乙酰转移酶基因(cat)的烟草花叶病毒的RNA导入洋葱表皮细胞，使cat基因在洋葱

中得到表达。1990年美国BioRad公司根据

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Sanford等的研究推出商用基因枪PDS-1000/HE系统，随后基因枪法在基因转导中得到广泛应用。

与此同时，高压放电[13]、压缩气体驱动[14]等各种类型基因枪也相继出现，并在反复实践中得到改善和

发展，其改进的核心是粒子加速系统，目的是提高射弹的可控度(粒子的运动速度和射入的深度等)。

这些改进不但提高了微粒轰击法基因转导的效率，而且结果的可重复性也得到了提高。但是，所有的

这些方法都是基于同一个原理，即将钨粉或金粉微粒加速到很高的速度使之穿透植物细胞壁，或其它

类型细胞的核或具有DNA序列的质粒的外围蔽障。微粒轰击技术的出现是禾谷类植物的遗传转化取得

重大进展的标志。现在，主要的禾谷类作物，如水稻、玉米、小麦[15]和大麦等，都已通过基因枪法进

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行了成功的转导，并得到目的基因正确表达的转基因植株。Zhou等用基因枪法将耐草甘膦土壤杆

菌属CP草甘膦氧化还原酶(GOX)基因转导到小麦幼胚中，获得了耐草甘膦的转基因小麦植株。Barro

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等[17]和何等[18]用基因枪法将编码高分子量麦谷蛋白亚基的基因(1Ax1和/或1Dx5)导入普通小麦和硬

粒小麦中，获得表达外源目的基因的转基因小麦，面筋功能分析表明，