紫杉醇对膀胱癌EJ细胞株增殖抑制及诱导凋亡的作用.pdfVIP

如有你有帮助，请购买下载，谢谢！

紫杉醇对膀胱癌EJ细胞株增殖抑制及诱导

凋亡的作用

作者：郭春龙黄艳丽朱晓敏张春阳冯禄王赞滔姜华茂

【关键词】紫杉

摘要：目的：探讨紫杉醇体外抑制膀胱癌EJ细胞株及诱导凋

亡的作用。方法：体外培养膀胱癌EJ细胞株，以不同浓度紫杉醇处理

12～72h后，通过MTT法测定细胞生长抑制作用，采用电镜观察和DNA

琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：紫杉醇能抑制EJ细胞的生长，

并在一定剂量和时间范围内呈现出明显的时间、浓度依赖关系。电镜

下凋亡细胞体积缩小，染色质浓缩致密，并沿核膜分布形成花瓣形。

电泳见出现典型的凋亡DNA梯形带。结论：紫杉醇能抑制膀胱癌EJ

细胞株的生长，诱导凋亡可能为其抗肿瘤作用机制之一。

关键词：紫杉醇；膀胱癌；细胞凋亡

膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤，手术切除是膀胱癌治疗

的首选方法。但是膀胱癌的易复发性常使单纯采用手术疗法难以获得

满意疗效，应用化疗作为辅助治疗手段可望减少肿瘤患者的复发率，

提高其生存率。紫杉醇（Paclitaxel，商品名：Taxol）是从紫杉树皮

中提取的一种新型抗微管广谱抗癌药，具有特异性地稳定细胞微管的

作用［1］。本研究旨在体外观察紫杉醇对膀胱癌EJ细胞株的抑制和诱

导凋亡作用，以探讨紫杉醇对膀胱癌的临床应用价值。

1材料与方法

11试剂

1页

如有你有帮助，请购买下载，谢谢！

紫杉醇由上海华联制药有限公司提供，临用前稀释至所需浓

度；RPMI1640培养基(含10％胎牛血清，青霉素及链霉素各100U/ml)；

L谷氨酰胺2mmol/L、丙酮酸钠1mmol/L购自华美公司；四甲基偶氮唑

蓝（MTT）购自Sigma公司。

12细胞培养

人膀胱癌EJ细胞株购自上海午立生物有限公司，培养于含有

10％胎牛血清，100U/ml青霉素、链霉素的培养基中，在37℃、5％CO2

培养箱内常规传代培养。取对数生长期细胞用于实验。

13实验分组

对照组：不加药，每天更换1640全培养液。实验组：紫杉醇

浓度分别为10、50、100、500nmol/L，接种细胞24h进入对数生长期

后开始加药，每天换液以维持药物浓度恒定。

14细胞毒性分析

应用MTT比色法测定不同浓度紫杉醇对EJ细胞增殖的影响，

并绘制剂量效应曲线。将对数生长期的EJ细胞以0.25％胰蛋白酶消

化，用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液配成单细胞悬液，细胞数

为2×104/ml接种于96孔培养板。接种细胞24h进入对数生长期后开

始加入不同终浓度的紫杉醇，每浓度设4个复孔，并设对照孔。置于

37℃含5％CO2孵箱中分别培养12、24、48、72h后每孔加MTT（5mg/ml）

20μl。作用4h后弃上清，各孔加入100μlDMSO，振荡10min，使结

晶物充分溶解。在酶标仪570nm波长处读取吸光度A值。细胞生长的

抑制率（％）＝（对照组A值－实验组A值）/对照组A值×100％［2］。

2页

如有你有帮助，请购买下载，谢谢！

15透射电子显微镜观察

取对照组及实验组细胞（细胞数量为106～107）倒出瓶中培

养液，用PBS液（0.01mol/L，pH7.2）洗3min×3次，后加入2.5％

戊二醛4℃放置10min。用接种环刮下细胞移入离心管中，2000r/min

离心15min。用接种环刮起细胞块，将细胞块与戊二醛一起转移到青

霉素小瓶中，4℃放置2h。用PBS洗3min×3次（注意加液时一定不

要冲散细胞团