生物分离工程发酵液预处理.ppt

1、沉降系数S单位离心力作用下粒子的沉降速度，以Svedberg表示，简称S。1S=1×10-13s离心沉降速度沉降速度是指在强大离心力作用下，单位时间内物质运动的距离。是离心设备的一个重要技术指标，是其所能达到的离心力与重力的比值。第31页,共61页，星期六，2024年，5月2、离心力离心力(Centrifugalforce)：离心力作为真实的力根本就不存在，在非惯性系中为计算方便假想的一个力。相对离心力（Relativecentrifugalforce，RCF）：通常离心力常用地球引力的倍数来表示，指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度“g”。注：n(rpm)应折换成转/秒一般情况下，低速离心时常以转速“rpm”来表示，高速离心时则以“g”表示。第32页,共61页，星期六，2024年，5月3、离心机的种类与用途按转速分：常速（低速）、高速和超速（1）、常速离心机8000r/min，RCF1×104g用途：分离细胞、细胞碎片、培养基残渣及粗结晶等较大颗粒（2）、高速离心机1×104g～2.5×104r/min，RCF1×104g～105g用途：分离各种沉淀物、细胞碎片及较大的细胞器等高速冷冻离心机第33页,共61页，星期六，2024年，5月（3）、超速离心机2.5×104r/min～8×104r/min，RCF5×105g或更高结构：离心管帽、冷冻装置和温控系统、真空系统、安全保护系统、制动系统、指示仪表等。按用途分：制备用超速离心机：分离纯化生物大分子、细胞器和病毒等分析用超速离心机：测定样品纯度（根据紫外吸收率或折光率等判断）、沉降系数、相对分子量第34页,共61页，星期六，2024年，5月4、离心方法的选择对于常速和高速离心机，由于所分离的颗粒大小和密度相差较大，只要选择好离心速度和时间，就能达到分离效果。超速离心的离心方法：差速离心、密度梯度离心和等密度梯度离心第35页,共61页，星期六，2024年，5月（1）差速离心采用不同的离心速度和离心时间，使沉降速度不同的颗粒分批分离的方法。主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。第36页,共61页，星期六，2024年，5月（2）密度梯度离心样品在密度梯度介质中进行离心，使沉降系数比较接近的物质得以分离的一种区带分离方法。密度梯度系统：梯度介质有足够大的溶解度，不与分离组分反应，不会引起分离组分的凝集、变性或失活。常用介质：蔗糖、甘油等。样品铺在密度梯度溶液表面，离心后形成若干条界面清楚的不连续区带。第37页,共61页，星期六，2024年，5月梯度混合器第38页,共61页，星期六，2024年，5月（3）等密度离心当欲分离的不同颗粒的密度范围在离心介质的密度梯度范围内时，不同浮力密度的物质颗粒在离心力作用下一直移动到与各自浮力密度相等的位置（等密度点），形成区带。等密度离心常用的介质：铯盐，如CsCl，Cs2SO4，CsBr第39页,共61页，星期六，2024年，5月5、离心条件的确定离心力（转速）离心时间温度pH值第40页,共61页，星期六，2024年，5月6、离心机械管式离心机分为液－液分离的连续式管式离心机和液固分离的间歇式管式离心机。结构简单转速很高有利于蛋白质的分离间歇操作第41页,共61页，星期六，2024年，5月碟片式离心机是一种应用最广泛的离心机有一个密封的转鼓，内装十至上百个锥顶角为60~100゜锥形碟片。固体的沉降距离极短，分离效果较好。碟片间的距离一般为0.5~2.5mm,与被分离物料的性质有关。第42页,共61页，星期六，2024年，5月分类人工排渣的碟片离心机喷嘴排渣的碟片离心机活门（活塞）排渣的碟片离心机活门排渣的喷嘴碟片式离心机（这是近年来开发的机型，它和相同直径的活塞机相似，其速度可增加23%~30%,故可使分离因素达15000左右，该机型可用于酶制剂，疫苗和胰岛素生产中分离物的澄清，醇的生产中细菌的采集以及r-DNA中采集和澄清。第43页,共61页，星期六，2024年，5月三、过滤（Filtration)过滤操作是借助于过滤介质，在一定的压力差ΔP作用下，将悬浮液中的固体粒子截留，而与液体分离的技术。衡量过滤特性的主要指标是滤饼的重量比阻rB，它表示单位滤饼厚度的阻力系数，与滤饼的结构特性有关。对于不可压缩性滤饼，比阻值为常数，但对于可压缩性滤饼，比阻rB，是操作压力差的函数第44页,共61页，星期六，2024年，5月影响过滤的因素菌种：真菌，放线菌，细菌培养基：黄豆，花生，淀粉，后期加油，培养基未用完发酵时