陆地棉早花基因GhPRR9的功能分析及验证.docx

陆地棉早花基因GhPRR9的功能分析及验证

目录

内容描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.2研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.3文献综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.1.1陆地棉品种．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.1.2试验环境条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.1.3实验仪器与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.2.1基因克隆与表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.2.2功能验证实验设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.2.3数据收集与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

GhPRR9基因的克隆与表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

3.1目的基因的克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

3.2GhPRR9基因表达模式研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

3.2.1不同生长阶段的表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

3.2.2胁迫条件下的表达变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

3.3GhPRR9基因的功能验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

3.3.1过表达载体构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

3.3.2沉默载体构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

3.3.3功能互补实验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

GhPRR9基因在植物抗病性中的作用分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

4.1基因敲除突变体表型分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

4.1.1抗病性状表现．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

4.1.2生理生化指标测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

4.2基因功能鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

4.2.1蛋白表达水平分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

4.2.2免疫印迹分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

4.2.3亚细胞定位分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

4.3基因互作网络分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

4.3.1转录因子预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

4.3.2蛋白质蛋白质相互作用分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

GhPRR9基因在植物生长发育中的作用分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

5.1基因表达模式研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

5.1.1发育阶段特异性表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

5.1.2胁迫响应表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

5.2基因功能验证．．．．．．．．．．．．