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新冠病毒核酸检测SOP

1.目的

根据《感染的肺炎实验室检测技术指南》，规范本中心感

染的肺炎的检测方法。

2.适用范围

体外定性检测感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、

其他需要进行感染诊断或鉴别诊断者的口咽拭子、鼻咽拭子和

痰液样本检测。

3.职责

3.1检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测；

3.2复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是

否准确进行复核；

3.3科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。

4.检测依据

《感染的肺炎实验室检测技术指南》

5.操作程序

5.1实验前准备

5.1.1检测人员进入污染区前，必须穿好一次性防护服、

一次性帽子、N95口罩、双层手套、一次性靴套、护目镜、防

护面屏不得将与实验无关物品带入实验室。

5.1.2调节室温至20-25°C,湿度20-80%o

5.1.3检测试剂在室温平衡半小时;并检查试剂是否在有效

期内。

5.1.4检查仪器是否正常，做好检测前准备工作。

5.1.5开启实验室污染区生物安全柜

5.2实验方法见试剂申明书

【检验方法】

5.2.1试剂准备（试剂准备区）

从试剂盒中取出核酸扩增反应液、酶混合液、ORFlab/N

反应液，室温融化，充分振荡混匀后瞬间离心。

计算试剂使用份数N（N=样本数+1管阳性对照+1管阴性

对照），根据下表配置反应体系，力口入一适当体积离心管中，

充分振荡混匀后瞬间离心，按20U1.分装至PCR反应管中，

并转移至样本处理区。

加入体积（ML）/人份

ORFlab/N反应液

总体积20

5.2.2样本处理（样本处理区）

①核酸提取：待测样本、阳性对照及阴性对照按照核酸提

取试剂盒说明书进行操作。②加样：在上述准备好的PCR反

应管中分别加入待测样本核酸、阳性、阴性对照各5u1.,终体

积为25u1./管，盖紧管盖，瞬时离心。

5.2.3PCR扩增检测（核酸扩增区）

①将PCR反应管置荧光定量PCR仪扩增检测。

插上仪器电源线，打开仪器背部的电源开关，仪器开机初

始化。等待至指示灯停止闪动，变成稳定绿色，进入下一步操

作。

②打开电脑桌面qsoft4.1软件，进入qsoft4.1用户界面，

表明仪器与电脑连接成功,进入下一步操作。

③新建程序：单击菜单栏中标页目一、创建新的程序。或

者调入已保存的PCR程序模板文件，运行程序。

④若创建新程序，点击创建项目。设置PCR基本参数、

文件名、反应体系、操作者等。⑤设置实验程序，温度循环设

置按试剂盒说明书中“循环参数设定、设置（如图）。循环参

数设定

申明：

A、步骤3中55C时设置荧光检测。

B、在勾选基因通道时需要填写检测号（管1,在此处可以

填写检测基因号或者

1,2,3,4）

点击储存，储存我们所创建的新程序。

⑥在界面左下角点击Home,实验Home界面提供了多种进

入实验导游的入口，用户点击实验导游。

⑦更改文件名、操作者，勾选模块，基因通道默认为我们

所设置的，如需要可勾选全通道扫描。

⑧“孔板编辑、设置样品孔定义，根据我们样品数设置孔

板，点击右下侧的样本项目，进行样本类型的更改，设置阴阳

对照。

⑨反应条件全部设好后，打开仪器蓝色滑盖，放入样品，

盖上盖子，点击“实验运行、，再点击开始，即可开始运行程

序。截止程序，暂停程序。运行程序前，会要求设置好结果文

件储存路径，运行结束后，结果文件主动储存在指定的文件夹

中。

⑩结果分析参数设定

根据分析后扩增曲线图调节起止值，（建议起始设在

3~15、终止设在5-20,同时调整阴性对照的扩增曲线平直或低

于阈值线），点击分析，在报告界面查看结果。

【阳性判断值】

根据临床样本检测结果，利用R0C曲线法确