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乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》
实验一细菌的简单染色和细菌形态的观察
一、实验原理
简单染色采用一种染料对菌体进行染色，常用结晶紫、美蓝、碳酸复红等碱性染料。染色后，
菌体与背景形成鲜明对比，在显微镜下很容易被识别。通过简单染色方法可以观察细菌的菌
体形态特征和菌体的排列方式。
观察菌体形态
简单染色
（只用一种染料）观察菌体排列方式
染色方法革兰氏染色
鉴别
鉴别染色抗酸性染色
（利用两种染料）芽孢染色
观察特殊结构荚膜染色
鞭毛染色
二、实验步骤：
涂片干燥固定染色水洗干燥镜检
三、思考题
1、制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节？
答；（1）涂片：开始所加无菌水液滴不要太大，否则不易干燥；
取菌量要适宜且要涂抹均匀，避免过大造成堆积，而难以看清细胞个体形态
同时也应避免取菌量太少而难以在显微镜视野中找到细胞。
（2）无菌操作取菌：一定要等接种换冷却后再取菌，以免高温使菌体变形；
（3）干燥固定：干燥后加热固定，可避免加热时间过长，否则细胞会破裂或变形；
（4）固定：菌膜一面朝上，通过酒精灯微火三次。注意温度不宜过高，时间不宜太长，否
则菌体形态则会发生改变。
（5）水洗：倾去染色液后，用水沿着菌膜四周冲洗，注意勿使水流直接冲洗菌膜部位，水
流不宜过急，过大，至流出水无色为止；
2、为什么要求制片完全干燥才能用油镜观察？
答：使用油镜时，物镜与标本间的介质为香柏油（N=1.515），不仅增加了透明度，而且会提
高了分辨率。0.61
分辨率D＝
ngSin(/2)
若制片不完全干燥后，就用油镜观察，则N会减小，分辨率D也会变小。而且还会造成油
水两相不互溶，所以制片要求完全干燥后才能用油镜观察。
3、如果涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高，时间太长，又会怎样
呢？
答：加热固定的作用是使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大
多数细菌而且不破坏细胞形态，而且还可增加细胞对染料亲和力。
（1）如果图涂片未经加热固定，则细胞无法固定在载玻片上，在染色水洗后会被水流冲走。
（2）如果加热温度过高，时间太长，则会使细菌形态发生变化甚至破裂。
4、为什么细菌染色常用碱性染料？什么情况下用酸性染料？
答：（1）细菌染色常用碱性染料，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带
负电荷，而碱性染料电离后染色部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色。
乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》
（2）当细胞处于酸性条件下（如细菌分解糖类产酸）所带正电荷增加时，可采用酸性染料
染色。
实验二细菌的革兰氏染色法
一
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