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乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

PCR技术概论

PCR技术简史

PCR技术的基本原理

PCR反应体系与反应条件

PCR反应特点

PCR扩增产物的分析

聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增

技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能

在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使

肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分

析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情，用PCR几小时便可完成。PCR技术是

生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。

PCR技术简史

PCR的最早设想核酸研究已有100多年的历史，本世纪60年代末、70年代初人们致

力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA

变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基

因”。

PCR的实现1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了具有划时代

意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成提

供以致一种合适的条件摸板DNA，寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合适的缓冲体系，DNA

变性、复性及延伸的温度与时间。

PCR的改进与完善Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的

Klenow片段，其缺点是：①Klenow酶不耐高温，90℃会变性失活，每次循环都要重新加。

②引物链延伸反应在37℃下进行，容易发生模板和引物之间的碱基错配，其PCR产物特异

性较差，合成的DNA片段不均一。此种以Klenow酶催化的PCR技术虽较传统的基因扩增具

备许多突出的优点，但由于Klenow酶不耐热，在DNA模板进行热变性时，会导致此酶钝化，

每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期，给PCR技术操作程序添了不少困难。这使得PCR

技术在一段时间内没能引起生物医学界的足够重视。

1988年初，Keohanog改用T4DNA聚合酶进行PCR，其扩增的DNA片段很均一，真实

性也较高，只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次，仍需加入新酶。

1988年Saiki等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermusaquaticus)中提取到一种耐

热DNA聚合酶。此酶具有以下特点：①耐高温，在70℃下反应2h后其残留活性大于原来

的90%，在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%，在95℃下反应2h后其残留活性是

原来的40%。②在热变性时不会被钝化，不必在每次扩增反应后再加新酶。③大大提高了

扩增片段特异性和扩增效率，增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率，因

乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶IKlenow片段区别，将此酶命名为TaqDNA多

聚酶(TaqDNAPolymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。

PCR技术的基本原理

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互

补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：

模板DNA