新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程 .pdf

新城疫冻干疫苗生产工艺流程

1生产用毒种制备

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1.1毒种繁殖将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10或10),尿囊腔内接种10日龄

SPF鸡胚,每胚0.1ml。选接种后72~120小时死亡、且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊

液与羊水),装于灭菌容器内。将检验无菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的

鸡胚液混合,定量分装于安瓿中,冷冻保存。注明收获日期,毒种代数等。

1.2毒种鉴定

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病毒含量按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10、10、103个

稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以

前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度

的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获

鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160(微量法1:128)者判为感染，计算EID，每

50

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0.1ml病毒含量应≥10EID。

50

纯净应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按《无菌检验或纯粹检验标准操

作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒检验标准操作规程》进行。

1.3毒种保存在-15℃以下保存,应不超过1年。

1.4毒种继代应不超过3代。

2制苗材料选择选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。

3制苗用毒液的制备

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3.1接种取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10或10),每胚尿囊腔内接种

0.1ml，接种后密封针孔，置36~37℃继续孵育，不必翻蛋。

3.2孵育和观察鸡胚接种后,每日照蛋一次，将在60小时前死亡的鸡胚弃去。60小时后,

每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120小时,不论死亡与否,全部取出,气室

向上直立,置于2~8℃冷却。

3.3收获将冷却4~24小时的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部

卵壳，剪开尿囊膜，吸鸡胚液,每若干个鸡胚的胚液混合为一组。收获后的胚液置于灭菌瓶

中，作好标识，留样后，结冻保存。

在收获胚液的同时,应逐个检查鸡胚,如胎儿腐败、胚液混浊与有任何污染可疑者弃去

不用。

4半成品检验

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4.1无菌检验经处理过的胚液,每组分别取样,按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》进

行无菌检验,应无细菌生长。

4.2病毒含量测定

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按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10、10、103个稀释度各尿囊

腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚

弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度的胚液等量混合，

按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获鸡胚液，分别测定

红细胞凝集价，凝集价≥1:160(微量法1:128)者判为感染，计算EID，每0.1ml病毒含

50

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量10EID者可用于配制疫苗。