高效液相色谱仪的操作步骤 液相色谱解决方案 .pdfVIP

高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方

案

高效液相色谱仪操作步骤：

1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.

2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。

3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好

流动相管道，连接检测系统。

4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜

单。

5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵

和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，

需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度

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不要超过10ml/min。

6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，

流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适

的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。

7）．设计走样方法。点击file，选取se—lectusersand

methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，

点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，

依据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需

要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀

的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8）．进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，

全部的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和

做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩

余物。

9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。

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10）．填写登记本，由负责人签字。注意事项：

11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。脱气后的

流动相要当心振动尽量不引起气泡。12）．柱子是特别脆弱的，第

一次做的方法，先不要让液体过柱子。

13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。

14）．压力不能太大，可以不要超过2000psi。

液相色谱流动相说明

流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。那么

流动相都需要注意什么呢？

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01、过滤溶剂

溶剂在使用前确定要用0.5μm的过滤器过滤，假如使用固体化

学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别紧要，不能让固体微粒污

染泵，堵塞进样器和柱头过滤片。本试验室有水溶性和脂溶性两种

过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），

先用1～2mL甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。

02、保持储液瓶的清洁

用一般溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应

用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

03、保证溶剂的质量

确定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用

高纯度的缓冲盐。

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一些因流动相引起的常见问题

01、流动相脱气不充分

流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡

进入泵内引起压力波动，加添噪音，色谱图上显现毛刺。可试用下

列方法解决问题：流动相再脱气；接受更有效的脱气方法或两种方

法搭配使用；改系统内混合为系统外预混合。

02、流动相供应不畅

流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。应常常察看储

液器中流动相的量，加足流动相保证全部的样品分析完毕。输液管

道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其

不能上下移动。

过滤器堵塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。过滤器被微粒所

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堵塞或长霉，去掉过滤器后假如系统运转正常，说明已找出问题，

换上新的过滤器则可。有时候换上新的过滤器仍旧不畅