临床检测-谷丙转氨酶活性的测定.pptVIP

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2024-12-25 发布于上海
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临床检测-谷丙转氨酶活性的测定.ppt

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血清丙氨酸氨基转移酶活性测定

（改良赖氏法）三峡大学医学院生物化学教研室临床指标的检测掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的基本原理。01.熟悉血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的具体操作方法。02.了解血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的临床意义。03.【目的要求】临床意义谷丙转氨酶(GlutamicpyruvicTransaminase，GPT)丙氨酸氨基转移酶(AlanineTransaminase，ALT)ALT(GPT)广泛存在于机体各种组织中，但在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是急性肝炎及肝细胞坏死，血清中谷丙转氨酶活性显著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此酶活性也可中度或轻度增高。010302如何测定酶的活性?活性单位定义中必须规定哪些条件?卡门氏单位的定义为：在紫外分光光度计中，1ml血清(反应溶液总量为3ml)在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，在25℃，1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸氢酶催化下，使NADH+H+变成NAD+，使光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。丙氨酸+α-酮戊二酸谷氨酸+丙酮酸GPT乳酸氢酶NAD++乳酸NADH+H+改良赖氏法丙氨酸+α-酮戊二酸谷氨酸+丙酮酸GPT乳酸氢酶NAD++乳酸NADH+H+显色反应分光光度法赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用卡门氏单位作表示的。【实验原理】血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：实验操作012345丙酮酸标准液(ml)0.000.050.100.150.200.25ALT底物试剂(ml)0.500.450.400.350.300.250.1M磷酸盐缓冲液pH7.4(ml)0.100.100.100.100.100.10相当于GPT活性(卡门氏单位)0.0028579715020037℃水浴预温5分钟，各管加2,4-二硝基苯肼0.5ml混匀，再在37℃水浴中放置20分钟后，各管加0.4mol/LNaOH溶液5ml，混匀放置10分钟后，以蒸馏水调零点，用520nm波长比色，读取各管光密。.各管的读数均减去对照管(O管)的光密度，然后以光密度值为纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。1.标准曲线的制作: